MT0102 CCK8細(xì)胞增殖與毒性檢測(cè)試劑

CCK8細(xì)胞增殖與毒性檢測(cè)試劑是高品質(zhì)的工具酶產(chǎn)品，由北京百奧萊博供應(yīng)，本產(chǎn)品僅用于生物化學(xué)研究方面，我公司專注于工具酶產(chǎn)品的研發(fā)、生產(chǎn)和供應(yīng)，為您提供的CCK8細(xì)胞增殖與毒性檢測(cè)試劑質(zhì)量可靠，批間差小，且價(jià)格公道，熱切盼望您選購(gòu)我們的產(chǎn)品。...

特別提示：包括CCK8細(xì)胞增殖與毒性檢測(cè)試劑在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：CCK8細(xì)胞增殖與毒性檢測(cè)試劑
英文名稱：CCK8 cell proliferation and toxicity test reagents
產(chǎn)品貨號(hào)：MT0102
產(chǎn)品規(guī)格：100次(1ml)|500次(1ml×5)

本制品是一種基于WST-8的廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性檢測(cè)的試劑，因其操作簡(jiǎn)單快速、高靈敏度且細(xì)胞毒性低等成為替代MTT法檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)密度的zuì好方法。該試劑盒利用水溶性四唑鹽-WST-8在電子載體1-Methoxy PMS存在的情況下能夠被還原成水溶性的甲臜染料，生成的甲臜量與活細(xì)胞數(shù)量成正比。細(xì)胞增殖越多越快，則顏色越深；細(xì)胞毒性越大，則顏色越淺。對(duì)于同樣的細(xì)胞，顏色的深淺和細(xì)胞數(shù)目呈線性關(guān)系。本制品廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖測(cè)定、細(xì)胞毒性測(cè)定、藥物篩選、腫瘤藥敏試驗(yàn)等。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
·靈敏度高，數(shù)據(jù)重復(fù)性好；
·操作簡(jiǎn)單，安全性高；
·細(xì)胞毒性低，無(wú)需放射性同位素；
·單一組分，無(wú)需配制。

應(yīng)用實(shí)例：

接種96孔板293T細(xì)胞，每孔加入10μl CCK-8溶液，混合均勻，在37℃，5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，酶標(biāo)儀讀取不同培養(yǎng)時(shí)間的OD值，做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

操作方法：

一、細(xì)胞計(jì)數(shù)測(cè)定
1．96孔培養(yǎng)板中貼壁或懸浮細(xì)胞100μl/孔培養(yǎng)體積(>2000個(gè)細(xì)胞/孔)。
2．向每孔加入10μl的CCK- 8溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會(huì)影響O.D值的讀數(shù))。如果起始的培養(yǎng)體積為200μl，則需加入20μl CCK-8溶液。
  注意：加了相應(yīng)量細(xì)胞培養(yǎng)液和CCK-8溶液，但沒(méi)有加入細(xì)胞的孔作為空白對(duì)照。
3．將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí)。
4．用酶標(biāo)儀測(cè)定在450 nm處的吸光度。
5．如果暫時(shí)不測(cè)定O.D值，打算以后測(cè)定的話，可以向每孔中加入10μl 1% w/v SDS溶液或者0.1M HCl溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存。在24小時(shí)內(nèi)吸光度不會(huì)發(fā)生變化。

二、細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞毒性檢測(cè)
1．96孔培養(yǎng)板中貼壁或懸浮細(xì)胞100μl/孔培養(yǎng)體積(＞5000個(gè)細(xì)胞/孔)。
2．向培養(yǎng)板加入10μl不同濃度的待測(cè)藥物。
3．將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r(shí)間（例如:6,12,24或48小時(shí))。
4．向每孔加入10μl CCK-8溶液(注意不要在孔中生成氣泡，它們會(huì)影響O.D值的讀數(shù))。
5．將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1～4小時(shí)。
6．用酶標(biāo)儀測(cè)定在450nm處的吸光度。
7．如果暫時(shí)不測(cè)定O.D值，打算以后測(cè)定的話，可以向每孔中加入10μl 1%w/v SDS溶液或者0.1M HCl溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存。在24小時(shí)內(nèi)吸光度不會(huì)發(fā)生變化。

三、制作標(biāo)準(zhǔn)曲線（需要測(cè)定細(xì)胞數(shù)量時(shí))
1．先用細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)所制備的細(xì)胞懸液中的細(xì)胞數(shù)量，然后接種細(xì)胞。
2．按比例(例如1:2的比例)依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個(gè)細(xì)胞濃度梯度，一般要做3～5個(gè)細(xì)胞濃度梯度，每組3～6個(gè)復(fù)孔。
3．接種后培養(yǎng)使細(xì)胞貼壁，然后加CCK-8試劑培養(yǎng)一定時(shí)間后測(cè)定O.D值，制作出一條以細(xì)胞數(shù)量為X軸，O.D值為Y軸的標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線可以測(cè)定出未知樣品的細(xì)胞數(shù)量（使用此標(biāo)準(zhǔn)曲線的前提條件是實(shí)驗(yàn)的條件要一致)。

注意事項(xiàng)：
1．接種時(shí)注意細(xì)胞懸液一定要混勻，以避免細(xì)胞沉淀下來(lái)，導(dǎo)致每孔中的細(xì)胞數(shù)量不等，可以每接種幾個(gè)孔就混勻一下。培養(yǎng)板周圍一圈孔培養(yǎng)基容易揮發(fā)，為了減少誤差，建議培養(yǎng)板的四邊每孔只加培養(yǎng)基或PBS，而不作為指標(biāo)檢測(cè)孔。
2．本制品的檢測(cè)依賴于脫氫酶催化的反應(yīng)，如果待檢測(cè)體系中存在較多的還原劑，例如一些抗氧化劑會(huì)干擾檢測(cè)，需設(shè)法去除。
3．用酶標(biāo)儀檢測(cè)前需確保每個(gè)孔內(nèi)沒(méi)有氣泡，否則會(huì)干擾測(cè)定。
4．培養(yǎng)時(shí)間根據(jù)細(xì)胞種類的不同和每孔內(nèi)細(xì)胞數(shù)量的多少而異。一般情況下，白細(xì)胞較難染色，因此需要較長(zhǎng)的培養(yǎng)時(shí)間或增加細(xì)胞數(shù)量（~10⁵個(gè)細(xì)胞/孔)。懸浮細(xì)胞與貼壁細(xì)胞相比較難染色。對(duì)于懸浮細(xì)胞，在培養(yǎng)1～4小時(shí)后，可先從培養(yǎng)箱中取出，目察染色程度或用酶標(biāo)儀測(cè)定決定。若染色困難，可將培養(yǎng)板放回培養(yǎng)箱，繼續(xù)培養(yǎng)數(shù)小時(shí)后再確定。 染色的zuì佳時(shí)間可定為懸浮細(xì)胞的zuì佳培養(yǎng)時(shí)間。對(duì)于貼壁細(xì)胞，培養(yǎng)時(shí)間一般為1～4小時(shí)，但在培養(yǎng)30分鐘左右即可取出肉眼觀察染色程度（根據(jù)細(xì)胞種類而定，需要摸索一下條件)。
5．若細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)，培養(yǎng)基顏色發(fā)生變化或pH發(fā)生變化，建議更換新鮮的培養(yǎng)基后再加CCK-8試劑。

保存條件：-20℃避光可保存2年，融化后 4℃避光放置可保存 1 年。反復(fù)凍融會(huì)增加背景值。

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BTN131196 Therminator II DNA聚合酶 100U
BTN130984 DNase I溶液 1.5mL
SV0061 AscI RE-Mix限制性內(nèi)切酶 50次
SV0218 BspQI限制性內(nèi)切酶 2500U|500U
SV0292 CspCI限制性內(nèi)切酶 2500U|500U
SV0462 MboII限制性內(nèi)切酶 1500U|300U|150U
SV0624 PvuI限制性內(nèi)切酶 2500U|500U|250U
SV0653 SacII限制性內(nèi)切酶 10KU|2KU|1KU

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名稱：DNase I溶液
貨號(hào)：BTN130984
規(guī)格：1.5mL
本產(chǎn)品是DNase I的10mg/mL的溶液，酶活性為1500-2500U/mg。DNase I從牛胰腺純化得到是一種可以消化單鏈或雙鏈DNA產(chǎn)生單脫氧核苷酸或單鏈或雙鏈的寡脫氧核苷酸的核酸內(nèi)切酶，分子量約32kDa(單體)。DNase I水解單鏈或雙鏈DNA后的產(chǎn)物，5′端為磷酸基團(tuán)，3′端為羥基。其活性依賴于鈣離子，并能被鎂離子或二價(jià)錳離子激活。鎂離子存在條件下，DNase I可隨機(jī)剪切雙鏈DNA的任意位點(diǎn)；二價(jià)錳離子存在條件下，DNase I可在同一位點(diǎn)剪切DNA雙鏈，形成平末端，或1-2個(gè)核苷酸突出的粘末端。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
1．即開(kāi)即用，不需要用戶單獨(dú)配置。
2．可用于制備RNase-free的DNase。本產(chǎn)品為粗制品，可能含殘留的RNase，不能直接用于清除RNA樣品中的DNA。
3．本產(chǎn)品可直接用于DNase I Footprinting實(shí)驗(yàn)、缺口平移(Nick Translation)、制備DNA隨機(jī)片斷文庫(kù)、制備TUNEL檢測(cè)中的陽(yáng)性對(duì)照。

儲(chǔ)存條件：低溫運(yùn)輸、-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
本產(chǎn)品可用于DNase I Footprinting實(shí)驗(yàn)、缺口平移(Nick Translation)、制備DNA隨機(jī)片斷文庫(kù)、TUNEL檢測(cè)中剪切基因組DNA作為陽(yáng)性對(duì)照。具體使用方法請(qǐng)參考相關(guān)資料。

注意：本產(chǎn)品濃度較高，如需對(duì)其進(jìn)行稀釋，需要自備DNase I儲(chǔ)存液。

DNase I儲(chǔ)存液的配方：50mM Tris-acetate(pH7.5)，10mM CaCl?，50%(v/v)甘油。

附錄：
1．DNase I活性定義：37℃10分鐘內(nèi)，將能夠完全降解1μg pBR322質(zhì)粒DNA所需的酶量定義為1個(gè)活性單位。
2．DNase I活性檢測(cè)條件：40mM Tris-HCl(pH8.0)，10mM MgSO4，1mM CaCl2，1μg of pBR322 DNA。
3．純度：不含其它DNA內(nèi)切酶和外切酶。
4．DNase I酶儲(chǔ)存溶液：50mM Tris-acetate(pH7.5)，10mM CaCl2，50%(v/v)甘油。
5．DNase I酶反應(yīng)液(10×)：100mM Tris-HCl(pH7.5 at 25℃)，25mM MgCl2，1mM CaCl2。
6．失活或抑制：加入EDTA至終濃度為2.5mM后，65℃加熱10分鐘可使DNase I失活。酚氯f(wàn)ǎng抽提也可以使DNase I失活。金屬離子螯合劑，達(dá)到毫摩爾/升濃度的鋅離子、0.1%的SDS、DTT、巰基乙醇等還原劑，50-100mM以上鹽濃度均對(duì)DNase I有顯著抑制作用。

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