SYA294 豬源性成分單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑

豬源性成分單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑由專業(yè)試劑供應(yīng)商北京百奧萊博提供，用于科研目的，本品質(zhì)量穩(wěn)定，價(jià)位合理，需要豬源性成分單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑等物種PCR檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品的客戶，請(qǐng)到我公司官網(wǎng)聯(lián)系我們。...

特別提示：包括豬源性成分單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：豬源性成分單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品貨號(hào)：SYA294
產(chǎn)品規(guī)格：48次/盒

一、簡(jiǎn)介：
本試劑盒用一對(duì)豬源性成分特異性引物，結(jié)合一條特異性熒光探針，用熒光PCR技術(shù)對(duì)豬源性成分DNA進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測(cè)。本試劑盒中豬源性成分的探針報(bào)告基團(tuán)為FAM。

二、用途：
該試劑盒適合于各種飼料及其它樣品中豬源性成分的檢測(cè)。

三、試劑盒組成：(40T/Kit)
組份 數(shù)量 規(guī)格
豬物種熒光qPCR反應(yīng)液(Pork-qPCR MIX) 1管 720μL/管
DNA抽提液(DNA Extraction) 2管 1.5mL/管
陰性對(duì)照(NTC) 1管 50μL/管
陽性對(duì)照(Pork-PTC) 1管 50μL/管

四、儲(chǔ)存條件及有效期：
本試劑盒于-20℃以下保存，有效期為6個(gè)月。

五、熒光PCR儀器適用范圍：
ABI系列，Bio-Rad系列，Roche系列等熒光定量PCR檢測(cè)儀等。

六、樣品采集與DNA提取
6.1 樣品采集
樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集按照標(biāo)準(zhǔn)《飼料中牛羊源性成分的定性檢測(cè)定性聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)法》(GB/T 20190-2006)要求進(jìn)行。
6.2 DNA提取
可按常規(guī)方法提取，也可采用商品化試劑盒提取DNA。
6.2.1 動(dòng)物組織、食品或飼料：直接取約50mg上述材料，勻漿后置入潔凈的1.5mL離心管中，加50μl DNA抽提液充分混勻(提取液用前需室溫溶解并充分混勻)后100℃15min，4℃降溫5min，13000rpm離心5min，取上清液5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。
6.2.2 血液：取500μL搖勻的抗凝血轉(zhuǎn)至一潔凈的1.5mL離心管中，加入1mL雙蒸水，劇烈震蕩30s，8000rpm離心5min，棄上清。重復(fù)清洗至無明顯紅色沉淀。加入1mL生理鹽水，劇烈震蕩15s，10000rpm離心5min，棄上清。沉淀加50μl DNA抽提液并與沉淀混勻，100℃恒溫15min，4℃降溫5min。13000rpm離心5min，取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。
 注：陽性對(duì)照和陰性對(duì)照為已經(jīng)抽提好的核酸(無需提取)，直接取5μL加入到反應(yīng)體系中即可。由于陽性對(duì)照濃度較高，建議zuì后在樣品制備區(qū)域加入陽性對(duì)照。

七、檢測(cè)步驟
7.1 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(Pork-qPCR MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽性對(duì)照)，每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 15μL N×15μL
向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品/陰性對(duì)照(NTC)/陽性對(duì)照(Pork-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入實(shí)時(shí)熒光PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM

八、結(jié)果分析：
8.1 結(jié)果分析條件設(shè)定
直接讀取檢測(cè)結(jié)果?；€和閾值設(shè)定原則根據(jù)儀器噪聲情況進(jìn)行調(diào)整，以閾值線剛好超過正常陰性樣品擴(kuò)增曲線的zuì高點(diǎn)為準(zhǔn)。
8.2 試驗(yàn)成立判定
(1)陰性對(duì)照(NTC)：不應(yīng)產(chǎn)生任何的擴(kuò)增曲線。
(2)陽性對(duì)照(Pork-PTC)：均產(chǎn)生擴(kuò)增曲線。
(3)以上條件應(yīng)同時(shí)滿足，否則，此次試驗(yàn)視為無效。
8.3 結(jié)果判定
(1)在試驗(yàn)成立的條件下，Ct值≤35的樣本為陽性，表明豬源性成分核酸陽性。
(2)Ct值顯示為無的樣本為陰性樣本，表明豬源性成分核酸陰性。
(3)如果35＜Ct值≤40，判為可疑樣品。對(duì)于可疑樣品，先看擴(kuò)增曲線。如果擴(kuò)增曲線為對(duì)數(shù)擴(kuò)增曲線，則為可疑陽性，否則判為陰性。
(4)對(duì)于可疑陽性樣品，重新抽提核酸，再次進(jìn)行豬源性成分qPCR檢測(cè)。如果重復(fù)擴(kuò)增曲線為對(duì)數(shù)擴(kuò)增曲線，判為樣本陽性，表明豬源性成分核酸陽性；否則判為樣本陰性。

九、注意事項(xiàng)：
(1)初次使用前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說明書。并嚴(yán)格按照說明書步驟操作。
(2)所有使用的離心管應(yīng)高壓滅菌，而且必須不含DNA酶。
(3)PCR操作應(yīng)嚴(yán)格按照要求分區(qū)(試劑配制區(qū)、標(biāo)本處理區(qū)、PCR擴(kuò)增區(qū)等)，防止實(shí)驗(yàn)室污染。
(4)樣本提取、試劑配置、加樣需在不同區(qū)的超凈工作臺(tái)進(jìn)行，以免污染。
(5)試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對(duì)待，并按照衛(wèi)生部《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理。


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