分光光度計測量吸光度時為什么讀數會不斷變化

發(fā)布時間：2020-12-21瀏覽次數：1551返回列表

我們在使用分光光度計測量吸光度時為什么讀數會不斷變化？是因為顯色反應還沒進行完全還是什么其他原因？其實不然，靈敏度越高的儀器，表現出的吸光值漂移越大。分光光度計的設計原理和工作原理，允許吸光值在一定范圍內變化，儀器是有一定的準確度和準確度。

1、樣品的稀釋濃度

樣品的稀釋濃度同樣是不可忽視的因素，由于樣品中不可避免存在一些細小的顆粒，尤其是核酸樣品。這些小顆粒的存在干擾測試效果。為使較大程度減少顆粒對測試結果的影響，要求核酸吸光值至少大于0.1A，吸光值在0.1-1.5A。在此范圍內，顆粒的干擾相對較小，結果穩(wěn)定。從而意味著樣品的濃度不能過低，或者過高(超過光度計的測試范圍)。

2、核酸本身物化性質

溶解核酸的緩沖液的pH值、離子濃度等在測試時，離子濃度太高也會導致讀數漂移，因此建議使用pH值一定、離子濃度較低的緩沖液（如TE）可大大穩(wěn)定讀數。核酸的吸光值受pH值和緩沖液離子濃度影響。只有在一定的pH值和低離子濃度的條件下(如10mMTris-HClpH8.0)，才能得到檢測結果。水的pH值不穩(wěn)定，可能導致檢測誤差。一些緩沖液在紫外范圍內存在自身吸收，為了確保準確測量，請使用與懸浮或洗脫樣品時相同的緩沖液。

3、分光光度計操作因素

1)使用儀器前，使用者應該首先了解本儀器的結構和工作原理，以及各個操縱旋鈕之功能。

2)儀器應放在干燥的房間內，使用時放置在堅固平穩(wěn)的工作臺上，室內照明不宜太強。熱天時不能用電扇直接向儀器吹風，防止燈泡燈絲發(fā)亮不穩(wěn)定。

3)在未按通電源之前，應該對儀器的安全性能進行檢查，電源接線應牢固，通電也要良好，各個調節(jié)旋鈕的起始位置應該正確，然后再按通電源開關。在儀器尚未接通電源時，電表指針必須于“0”刻線上，不是這種情況可以用電表上的校正螺絲進行調節(jié)。

4)若大幅度改變測試波長，需稍等片刻，等燈熱平衡后，重新校正“0”和“100”點，然后再測量。

5)比色皿使用完畢后，立即用蒸餾水沖洗干凈，并用干凈柔軟的紗布將水跡擦去，以防止表面光潔度被破壞，影響比色皿的透光率。

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