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質(zhì)粒提取的小技巧

發(fā)布時(shí)間:2018-01-04瀏覽次數(shù):1434返回列表

現(xiàn)在用質(zhì)粒提取試劑盒非常方便,而且菌體培養(yǎng)后,可以多管濃縮提取,提到的質(zhì)粒量多,可以-20℃保存,以后用于酶切、轉(zhuǎn)化等實(shí)驗(yàn),可以提前跑個(gè)膠,只要不降解,就可以繼續(xù)用,避免每次要用,都要培養(yǎng)一遍再提取一遍。

提取質(zhì)粒的時(shí)候,后一步的酒精揮發(fā)很關(guān)鍵,基本上是其后續(xù)的酶切反應(yīng)的決定性因素。所以這一步盡量揮發(fā)長(zhǎng)一點(diǎn)時(shí)間,是空調(diào)吹熱風(fēng),或是37度溫箱放長(zhǎng)一點(diǎn)的時(shí)間,我試過(guò)室溫過(guò)夜,酶切很好。

將amp濃度提高到200μg/mL,下班前接種,次日一早收獲菌體,此時(shí)OD雖然不高,質(zhì)粒豐度卻不一般。菌體量少些,操作體積(管數(shù))也?。ㄉ伲?。

手提質(zhì)粒,如果用氛氯仿和氯仿兩步抽提,再注意一下手法,嚴(yán)格按照參考書上面的操作的話,提出的質(zhì)粒不比任何質(zhì)粒提取試劑盒差,我感覺(jué)好像還好一點(diǎn),我就用過(guò)一次試劑盒,比較了之后不如我手提的好,以后再也沒(méi)用過(guò)了。