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如何評價總RNA或mRNA的質(zhì)量??

發(fā)布時間:2018-11-16瀏覽次數(shù):1210返回列表

      一個細胞有很多種的RNA,如mRNA,rRNA,tRNA總RNA指的是一個細胞(一種生物)里面所有種類的RNA平時說的提取總RNA指的就是提取一個細胞里面的所有種類的RNA 。

      mRNA的功能:把DNA模板鏈上的 堿基 序列 轉(zhuǎn)錄 為RNA分子上的堿基序列(mRNA),再從mRNA上的堿基序列通過合成蛋白質(zhì)的機構(gòu)獲得 氨基酸 序列。



如何評價總RNA或mRNA的質(zhì)量??


1. 相關(guān)概念 RNA質(zhì)檢參數(shù)OD260/OD280、OD260/OD230的意義。 260、280、320、230nm下的吸光度分別代表了核酸、蛋白質(zhì)、鹽濃度和有機溶劑的值。 A230: 測定其它碳源物質(zhì),如酚,糖類等。 A260:核酸的吸收峰測,測RNA,DNA,引物等的濃度用的。 A280:蛋白質(zhì)的吸收峰。 一般的,我們只看OD260/OD280(Ratio,R)在1.8~2.1范圍內(nèi)時,我們認為 RNA中蛋白的污染是可以容忍的,不過要注意,當用 Tris 作為緩沖液檢測吸光度時,R 值可能會大于 2(一般應(yīng)該是 2.2時,說明RNA已經(jīng)水解成單核酸了。純RNA的OD260/OD280的比值為2.0。

2. RNA質(zhì)量檢驗 RNA樣品的品質(zhì)檢測一般分為總量,純度與完整性三大項。 總量:微量分光光度計測260nm吸收值計算。 純度:微量分光光度計測260nm/230nm吸收值的比值,用于評估有機溶劑殘留;260nm/280nm吸收值的比值,用于評估蛋白質(zhì)污染比例。 完整性:以Agilent Bioanalyzer進行毛細管電泳(capillary electrophoresis),并以軟件的RIN(RNA Integrity Number)分數(shù)評估,10為RNA完整性zui好,0為zui差。 l RNA純度 RNA在純化過程中容易受到DNA、蛋白質(zhì)及有機溶劑的影響,這些殘存物將會影響以后的操作。光譜分析(NANODROP)利用物質(zhì)對不同波長光的吸收度的不同,可以鑒別出溶液純度及濃度。RNA溶液的A260/A280的比值是一種RNA純度檢測方法,比值范圍一般為1.8-2.1。各項實驗對RNA純度要求不一,比如即使比值超出這個范圍,RNA樣品也一樣可以用于一些普通實驗中,如Northern雜交、RT-PCR、熒光定量PCR和RNA酶保護等實驗。