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如何學(xué)會(huì)分離培養(yǎng)人的成纖維細(xì)胞?

發(fā)布時(shí)間:2019-01-07瀏覽次數(shù):1629返回列表

成纖維細(xì)胞(又稱皮膚成纖維細(xì)胞)屬于由中胚層分化而來的間質(zhì)細(xì)胞。細(xì)胞來源于人正常的皮膚組織,成纖維細(xì)胞是一種貼壁培養(yǎng)方式的細(xì)胞,由于這些細(xì)胞非常容易培養(yǎng),它們已經(jīng)被廣泛用于細(xì)胞和分子生物學(xué)研究中。

一般而言,成纖維細(xì)胞能夠分泌I型和 III 型膠原等細(xì)胞外基質(zhì),并且研究表明不同器官中的成纖維細(xì)胞有顯著的不同。

傷口修復(fù)時(shí),成纖維細(xì)胞由可增殖,可遷移的表型變?yōu)橛惺湛s性的,可重塑基質(zhì)的表型,同時(shí),它們會(huì)分泌大量的透明質(zhì)酸來應(yīng)對(duì)修復(fù)時(shí)的炎癥反應(yīng)。



以下是樊克提供的一種人成纖維細(xì)胞的制備方式(僅供參考):

    先在分離成纖維細(xì)胞時(shí)要做到在無菌條件下進(jìn)行,打開生物安全柜紫外燈 30min 作無菌處理。

    將手術(shù)廢棄的皮膚組織浸泡 75% 酒精,消毒 2min,

    將皮膚組織置含 P/S 的 PBS 中清洗至少 3 遍,

    然后用眼科剪除去脂肪及結(jié)締組織等,

    將皮膚剪成 0.5*0.5 cm 小塊,放入 dish 中,加 0.1% 的 dispase 溶液,封口膜封口,4℃ 冰箱過夜消化,

    第二天,用鑷子將表皮與分開(薄的那層是表皮,厚的那層是),

    將剪碎,移至離心管,用 0.1% 膠原 Ⅰ 型酶+0.1% 膠原Ⅱ型酶+0.1% 膠原Ⅳ型酶+ 37℃ 水浴鍋中消化至少 2 h(視消化程度而定),

    用 100 μm 網(wǎng)篩過濾,

    取濾液,300 g,離心5 min,

    用完全培養(yǎng)基重懸沉淀,

    鋪瓶,

    隔天換液。

以上是皮膚成纖維細(xì)胞分離培養(yǎng)的一種方式,不同的技術(shù)人員分離培養(yǎng)的方法也不同,使用的試劑比例也不盡相同,皮膚成纖維細(xì)胞特異性纖維連接蛋白或波形蛋白表達(dá)檢測(cè),采用細(xì)胞免疫熒光技術(shù)。細(xì)胞純度可高達(dá)于 90%,所有的細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作,并請(qǐng)注意防護(hù),所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。


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