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如何獲得正確的支原體檢測(cè)結(jié)果?

發(fā)布時(shí)間:2020-09-23瀏覽次數(shù):1222返回列表

可以說,到目前為止,針對(duì)體外細(xì)胞培養(yǎng)的支原體檢測(cè)的方法還沒有一種單獨(dú)使用就可以保證正確,既不會(huì)漏檢(假陰性),也不會(huì)多檢(假陽性)。

(1)支原體固體培養(yǎng)法。通過固體培養(yǎng)法無法檢測(cè)污染細(xì)胞的一種zui常見的支原體,即豬鼻支原體(M.Hyorhinis)。這是因?yàn)樨i鼻支原體無法在支原體固體培養(yǎng)基上形成可見的菌落,而豬鼻支原體約占所有支原體污染的20-50%。這就意味支原體固體培養(yǎng)法漏檢率高達(dá)20-50%。

(2)PCR法。PCR法導(dǎo)致的假陽性大家比較熟悉,無需多說。值得注意的是,由于細(xì)胞培養(yǎng)液中,經(jīng)常會(huì)含有強(qiáng)烈抑制PCR擴(kuò)增的代謝產(chǎn)物,如果不進(jìn)行樣品的前處理而直接使用細(xì)胞培養(yǎng)原液進(jìn)行PCR檢測(cè),產(chǎn)生假陰性的概率是非常大的。

(3)熒光染色法。由于該方法本身的靈敏度較低,輕度的支原體污染往往無法檢測(cè)出來。該方法漏檢率也不會(huì)低。

(4)檢測(cè)支原體特異性酶的方法,比如Lonza公司的Mycoalert Plus Mycoplas Detection Kit和上海古朵生產(chǎn)的《發(fā)光法支原體檢測(cè)試劑盒》。主要缺點(diǎn)是發(fā)光值有一定的波動(dòng),處于檢測(cè)下限邊緣的讀值可能會(huì)造成誤判。

(5)《一步法恒溫支原體檢測(cè)試劑盒》該方法盡管有許多優(yōu)點(diǎn),但是目前為止,我們只能保證該試劑盒能檢測(cè)出說明書上列舉的13種支原體,雖然這13種支原體大約占了所有污染細(xì)胞的支原體種類的99%左右,但是該方法也不能保證的支原體檢出率。

綜上所述,單獨(dú)使用目前市面上的任何一種支原體檢測(cè)試劑盒,都無法做到正確,既不會(huì)漏檢(假陰性),也不會(huì)多檢(假陽性)。嚴(yán)格的支原體檢測(cè),至少需要使用兩種,zui好使用三種不同原理的支原體檢測(cè)方法同時(shí)進(jìn)行檢測(cè),才能使檢測(cè)結(jié)果接近正確。

如果您想得到正確的支原體檢測(cè)結(jié)果(比如,開展細(xì)胞治療的客戶,進(jìn)行干細(xì)胞培養(yǎng)的客戶,生產(chǎn)血清、胰酶、培養(yǎng)液的客戶,出售各種原代培養(yǎng)細(xì)胞系和腫瘤細(xì)胞系的客戶等),任選本公司生產(chǎn)的《一步法恒溫支原體檢測(cè)試劑盒》、《PCR法支原體檢測(cè)試劑盒》、《發(fā)光法支原體檢測(cè)試劑盒》和《探針法支原體檢測(cè)試劑盒》中的兩種進(jìn)行檢測(cè),將會(huì)得到比較滿意的結(jié)果。如果幾種不同支原體檢測(cè)方法的檢測(cè)結(jié)果一致,正確率幾乎就