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支原體基本知識(shí)和檢測(cè)方法

發(fā)布時(shí)間:2021-05-14瀏覽次數(shù):1065返回列表

支原體又稱霉形體,是很小的原核細(xì)胞,完全沒有細(xì)胞壁.菌體形態(tài)多變,具高度多形性,球形、梨形、分枝的或螺旋的絲狀等。營(yíng)養(yǎng)要求苛刻,在高血清量的復(fù)雜培養(yǎng)基上生長(zhǎng),在固體培養(yǎng)基上菌落呈油煎荷包蛋樣特征性外觀。

培養(yǎng)基:牛心湯復(fù)合培養(yǎng)基等。

分離培養(yǎng):無(wú)菌采取肺、肝、脾、腎組織,直接剪成小塊放在固體培養(yǎng)基上劃一直線,再用無(wú)菌鉑耳環(huán)在與其垂直方向劃線,或者將組織塊剪碎磨成勻槳,經(jīng)液體培養(yǎng)基連續(xù)系列稀釋后培養(yǎng).若當(dāng)液體材料為牛乳、排泄物、胎液等,可直接取0.2ML接種于液體培養(yǎng)基或取0.1ML接種于固體培養(yǎng)基。固體瓊脂平板置37攝氏度潮濕需氧條件或在5%二氧化碳下培養(yǎng)48-96h,用斜射光或放大25-40倍的立體顯微鏡檢查,若有特異菌落出現(xiàn),應(yīng)選取散在的單個(gè)菌落用無(wú)菌解剖刀切下小瓊脂塊,用巴氏吸管小心地將菌落和周圍瓊脂吸入,再將其移入盛有2-3ML的液體肉湯培養(yǎng)管培養(yǎng)48h,將其培養(yǎng)物通過0.45微升孔徑大小的濾膜過濾后作1:10和1:100稀釋,每一個(gè)稀釋液取0.05ML涂布于幾個(gè)瓊脂平板,即可得到純的支原體培養(yǎng)物。

牛心湯復(fù)合培養(yǎng)基:
牛心湯1000ml
蛋白胨10g
氯化鈉5ml
酵母提取液10ml
無(wú)菌馬血清200ml
青霉素200IU/ml

實(shí)驗(yàn)之MP肺炎支原體培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)方法:

一、標(biāo)本采集

支原體常侵及人和動(dòng)物的粘膜表面,一般可用棉花拭子涂抹取樣后放入2~3ml支原體液體培養(yǎng)基的小管中,或取其分泌液,若標(biāo)本是組織塊,可在滅菌乳缽或玻璃勻漿后接種,取樣后應(yīng)盡快接種培養(yǎng)。

二、分離培養(yǎng)

1、支原體固體培養(yǎng)基接種法轉(zhuǎn)動(dòng)拭子將標(biāo)本液體盡量擠出,用無(wú)菌滴管吸1~2滴接種在平皿上蓋好,用L棒涂抹或傾斜轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使標(biāo)本均勻分布,置37℃孵育。

2、支原體半固體培養(yǎng)基接種法混種法:在制備半固體培養(yǎng)基時(shí),培養(yǎng)基加熱溶化,溫度降至50℃時(shí),添加動(dòng)物血清、酵母浸液及青霉素后混勻,待冷卻至37~40℃時(shí),用無(wú)菌滴管吸取標(biāo)本0.5~1ml加入培養(yǎng)基中,充分混勻,凝固后置37℃孵育。

3、穿刺接種法:方法同細(xì)菌接種法。

三、結(jié)果觀察

絕大多數(shù)支原體為兼性厭氧,少數(shù)在含10%CO2和相對(duì)濕度80~90%的大氣環(huán)境中生長(zhǎng)良好。支原體生長(zhǎng)緩慢,多數(shù)于3~4d長(zhǎng)出菌落,少數(shù)于1~2w方長(zhǎng)出典型菌落,在平皿固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落呈"油煎蛋"狀,邊緣不整齊。

四、附錄
糖酵解培養(yǎng)基(肺炎支原體培養(yǎng)基)
基礎(chǔ)培養(yǎng)基70ml
馬(或牛血清)20ml
25%酵母浸液10ml
0.4%酚紅0.5ml
青霉素10000IU/ml5.0ml
調(diào)pH7.8
肺炎支原體培養(yǎng)很簡(jiǎn)單的,特別是液體培養(yǎng),不需要防護(hù)!
配方上面的有點(diǎn)復(fù)雜而模糊,簡(jiǎn)單:
PPLO21g(商品化買)
酵母粉6g
馬血清200ml(沒有的話用小牛血清代替)
L-半胱氨酸0.3g
葡萄糖10g
1%酚紅4ml
AMP若干(0.1-0.2g,多加點(diǎn)不影響)
有時(shí)還加SMZ和TMP!
ph要調(diào)的,大概在7.5-7.6之間吧!
酚紅可以高壓的