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古朵淺談:重組蛋白究竟是什么?

發(fā)布時間:2021-11-10瀏覽次數(shù):1608返回列表

重組蛋白的產(chǎn)生是應(yīng)用了重組DNA或重組RNA的技術(shù)從而獲得的蛋白質(zhì)。體外重組蛋白的生產(chǎn)主要包括四大系統(tǒng):原核蛋白表達,哺乳動物細(xì)胞蛋白表達,酵母蛋白表達及昆蟲細(xì)胞蛋白表達。

重組蛋白獲得途徑:
重組蛋白需要使用表達系統(tǒng)來對其進行制備,其獲得途徑可以分為體外方法和體內(nèi)方法。兩種方法的前提都是應(yīng)用基因重組技術(shù),獲得連接有可以翻譯成目的蛋白的基因片段的重組載體,之后將其轉(zhuǎn)入可以表達目的蛋白的宿主細(xì)胞從而表達特定的重組蛋白分子。

體外重組蛋白的生產(chǎn)主要包括四大系統(tǒng):原核蛋白表達(常用的大腸桿菌蛋白表達),哺乳動物細(xì)胞蛋白表達(常用的細(xì)胞CHO,HEK293),真核表達系統(tǒng)(酵母)及昆蟲細(xì)胞蛋白表達。合適表達系統(tǒng)的選擇取決于重組蛋白的特性、重組蛋白的預(yù)期應(yīng)用以及該系統(tǒng)能否生產(chǎn)足夠量的蛋白質(zhì),根據(jù)自身的下游運用選擇合適的蛋白表達系統(tǒng),提高表達成功率。

重組蛋白表達系統(tǒng):

(1)目前應(yīng)用廣泛的表達系統(tǒng)有三大類,大腸桿菌(Esherichia coli)表達系統(tǒng)、酵母表達系統(tǒng)、CHO細(xì)胞表達系統(tǒng)。其中,大腸桿菌是表達重組蛋白常用的宿主菌,已應(yīng)用于許多具有重要藥用價值蛋白的生產(chǎn)。

大腸桿菌表達系統(tǒng)具有許多優(yōu)點,如生長快、培養(yǎng)成本低廉、遺傳背景清楚和易實現(xiàn)高密度培養(yǎng)等。大腸桿菌DH5α是一種誘變菌株,主要表現(xiàn)對外源DNA的免疫缺乏。大腸桿菌DH5α是基因工程常用的宿主菌之一,相比于正常菌種缺少了一定的免疫機制。

(2)不同的表達系統(tǒng)和培養(yǎng)方法顯著影響下游的處理過程,目標(biāo)蛋白表達是否形成包涵體,目標(biāo)蛋白表達的定位(胞內(nèi)、細(xì)胞膜內(nèi)、周質(zhì)空間和胞外),蛋白表達的量都依賴于所選擇的的表達系統(tǒng)。

重組蛋白表達系統(tǒng)

重組蛋白種類:
目前比較熱門的重組蛋白主要為細(xì)胞因子類,而細(xì)胞因子主要包括如下:
按功能分,可分為以下幾種:
1、白細(xì)胞介素(Interleukin,IL)
由多種細(xì)胞產(chǎn)生并作用于多種細(xì)胞的一類細(xì)胞因子。由于初是由白細(xì)胞產(chǎn)生且又在白細(xì)胞間發(fā)揮作用,所以得名,現(xiàn)仍沿用此名。

2、干擾素(interferon,IFN)
具有干擾病毒復(fù)制的能力,故得名。其具有十分廣泛的生物活性,在免疫應(yīng)答和免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用,也是主要的促炎細(xì)胞因子之一。干擾素分為:I型(7種,如IFN-α和IFN-β)和II型(僅有IFN-Y)。

3、腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor,TNF)
由于在體內(nèi)外均可直接殺傷腫瘤細(xì)胞而得名。其家族成員約有30個。

主要成員:
(1)TNF-α,一種單核因子主要由單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞產(chǎn)生;
(2)TNF-β,一種淋巴因子,主要由淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞等產(chǎn)生,其生物學(xué)活性與TNF-α相類似。

4、集落刺激因子(colony stimulating factor,CSF)
一組在體內(nèi)外均可選擇性刺激造血祖細(xì)胞增殖、分化并形成某一譜系細(xì)胞集落的細(xì)胞因子,包括巨噬細(xì)胞CSF、粒細(xì)胞CSF、巨噬細(xì)胞/粒細(xì)胞CSF、干細(xì)胞因子等。

5、生長因子(growth factor,GF)
一類可介導(dǎo)不同類型細(xì)胞生長和分化的細(xì)胞因子,根據(jù)其功能和所作用細(xì)胞的不同,分別命名為轉(zhuǎn)化生長因子(TGF)、神經(jīng)生長因子(NGF)、表皮生長因子(EGF)、血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)、成纖維細(xì)胞生長因子(FGF)等。

6、趨化性細(xì)胞因子(chemokine)
一類對不同靶細(xì)胞具有趨化效應(yīng)的細(xì)胞因子家族,可由白細(xì)胞和某些組織細(xì)胞分泌,是一個包括60多個成員的蛋白質(zhì)家族。大部分成員含4個保守的半胱氨酸(cysteine,C)根據(jù)其N端半胱氨酸的排列方式,可分為CXC、CC、C、CX3C四個亞族