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PBS的清洗方式選擇、次數(shù)和時(shí)間的選擇
發(fā)布時(shí)間:2022-05-27瀏覽次數(shù):970返回列表
(1)單獨(dú)沖洗,防止交叉反應(yīng)造成污染。
臨床上每天檢測(cè)的病例很多,所用的抗體種類及項(xiàng)目也多,如果在加入一抗孵育完后,將它們?cè)谝粋€(gè)缸內(nèi)洗,這樣就會(huì)造成交叉污染,影響后的結(jié)果。正確的做法是單獨(dú)地進(jìn)行沖洗,沖洗的PBS為一次性,保證切片沒(méi)有相互交叉污染的機(jī)會(huì)。
(2)溫柔沖洗,防止切片的脫落。
沖洗切片,取出切片,將PBS從上輕輕地沖洗,讓PBS自上而下流下來(lái),不要拿起切片將PBS對(duì)準(zhǔn)切片沖洗,這樣由于沖出的PBS有一定的沖擊力,很容易使切片周邊引起松動(dòng),導(dǎo)致切片的脫落。
(3)沖洗的時(shí)間要足夠,才能徹底洗去結(jié)合的物質(zhì)。
沖洗切片有人提出用微振蕩器振染,振下未結(jié)合的各種物,使之不產(chǎn)生背景,此種做法一是浪費(fèi)時(shí)間,二是很容易導(dǎo)致切片的脫落。切片的沖洗據(jù)實(shí)踐認(rèn)為,用一小燒杯柔和地于切片上沖洗,就能徹底沖洗去未結(jié)合的物質(zhì),無(wú)需附加其它條件,沖洗好于切片上再注入PBS,持續(xù)2分鐘左右就完全足夠了。
(4)PBS的PH和離子強(qiáng)度的使用和要求。
中性及弱鹼性條件(PH7-8)有利于免疫復(fù)合物的形成,而酸性條件則有利于分解;低離子強(qiáng)度有利于免疫復(fù)合物的形成,而高離子強(qiáng)度則有利于分解。
(5)常用試劑的配制和使用。
在免疫組織化學(xué)的染色過(guò)程中,用得多的試劑就是緩沖液,因?yàn)榍衅谡麄€(gè)染色中,抗體的加、換、切片的沖洗,DAB的配制都離不開(kāi)緩沖液??梢?jiàn)緩沖液在整個(gè)染色中都起至關(guān)鍵的作用,緩沖液的過(guò)酸或偏堿,都將影響染色的結(jié)果。