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菌體濃度測定方法/細(xì)菌計(jì)數(shù)方法
發(fā)布時(shí)間：2022-06-07瀏覽次數(shù)：1160返回列表
菌體濃度是指單位體積培養(yǎng)液中菌體的含量。常用的菌體濃度的測定方法（細(xì)菌計(jì)數(shù)方法）主要有以下幾種：
這是一種非常簡單的檢測方法，我們可以利用計(jì)數(shù)板或計(jì)數(shù)儀直接得出細(xì)菌數(shù)目。
1.1細(xì)菌計(jì)數(shù)板
首先制備細(xì)菌懸液，取一定體積的樣品細(xì)菌懸液置于細(xì)菌計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)池內(nèi)，用顯微鏡觀察計(jì)數(shù)。根據(jù)計(jì)數(shù)室刻度內(nèi)的細(xì)菌數(shù)，計(jì)算樣品中的含菌數(shù)。
特點(diǎn)：所需設(shè)備簡單，測定結(jié)果較準(zhǔn)確，可迅速得到結(jié)果，而且在計(jì)數(shù)的同時(shí)能觀察到所研究微生物的形態(tài)特征。不能區(qū)分是否為細(xì)菌，不能區(qū)分活細(xì)菌和死細(xì)菌。
單位：個(gè)/mL
計(jì)算方法：
（1）25×16的計(jì)數(shù)板：
每毫升細(xì)菌數(shù)量=（100小格內(nèi)的細(xì)胞數(shù)/100）×400×1000×稀釋倍數(shù)
（2）16×25的計(jì)數(shù)板：
每毫升細(xì)菌數(shù)量=（80小格內(nèi)的細(xì)胞數(shù)/80）×400×1000×稀釋倍數(shù)
1.2 電子計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)法
電子計(jì)數(shù)器也屬于直接計(jì)數(shù)法，其工作原理類似于血細(xì)胞分析儀，測定小孔中液體的電阻變化，小孔僅能通過一個(gè)細(xì)菌，當(dāng)一個(gè)細(xì)菌通過這個(gè)小孔時(shí)，電阻明顯增加，形成一個(gè)脈沖，自動(dòng)記錄在電子記錄裝置上。
計(jì)數(shù)單位：個(gè)/mL
特點(diǎn)：該法測定結(jié)果較準(zhǔn)確，但它只識(shí)別顆粒大小，而不能區(qū)分是否為細(xì)菌。因此，要求菌懸液中不含任何碎片。
2. 活菌計(jì)數(shù)法
常用的有平板菌落計(jì)數(shù)法（cfu法），其原理是每個(gè)活細(xì)菌在適宜的培養(yǎng)基和良好的生長條件下可以通過生長形成菌落。取一定容量的細(xì)菌懸液，制成幾個(gè)不同的10倍遞增稀釋液，然后從每個(gè)稀釋液中分別取出1mL置于滅菌平皿中與營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基混合，在一定溫度下，培養(yǎng)一定時(shí)間后（一般為48小時(shí)），記錄每個(gè)平皿中形成的菌落數(shù)量，依據(jù)稀釋倍數(shù)，計(jì)算出每mL原始樣品中所含活細(xì)菌的總數(shù)。
特點(diǎn)：此法靈敏度高，是臨床微生物檢驗(yàn)工作中常用的活菌計(jì)數(shù)法。前兩種方法會(huì)將活與死的細(xì)菌全部算入，但是此方法只計(jì)算活的細(xì)菌。
計(jì)數(shù)單位：cfu/mL（cfu是菌落形成單位，是指由單個(gè)菌體或聚集成團(tuán)的多個(gè)菌體在固體培養(yǎng)基上生長繁殖所形成的集落，稱為菌落形成單位，是計(jì)算細(xì)菌或霉菌數(shù)量的單位。cfu/mL指的是每毫升樣品中含有的細(xì)菌菌落總數(shù)。菌落形成單位的計(jì)數(shù)方式與前兩種計(jì)數(shù)方式不同，前兩種方法會(huì)將活與死的細(xì)菌全部算入，但是該方法計(jì)算活的細(xì)菌）。
3. 比濁法
比濁法又稱濁度測定法。為測量透過懸浮質(zhì)點(diǎn)介質(zhì)的光強(qiáng)度來確定懸浮物質(zhì)濃度的方法，這是一種光散射測量技術(shù)。常用的方法有：
3.1 麥?zhǔn)媳葷岱?/span>
McFarland發(fā)明了一種用于微生物比濁的不同濁度的標(biāo)準(zhǔn)濁度管，具體的配制方法是根據(jù)硫酸和氯化鋇的比例來定的
0.5ml氯化鋇（1.17%）加入99.5ml硫酸(1%），所得溶液濁度即為0.5麥?zhǔn)蠁挝弧?.5麥?zhǔn)蠞舛染菏桥R床微生物藥敏實(shí)驗(yàn)常用濃度，通常認(rèn)為，如將配菌液濃度配成0.5麥?zhǔn)媳葷峁軙r(shí)，相當(dāng)于1.5×108細(xì)菌數(shù)/mL）。
麥?zhǔn)媳葷峁芸梢宰约号渲?，也可購買商品化標(biāo)準(zhǔn)麥?zhǔn)媳葷峁埽瑢⒅苽涞木鷳乙号c標(biāo)準(zhǔn)麥?zhǔn)媳葷峁鼙容^，與多少麥?zhǔn)蠞岫鹊臐岫认嗤礊槎嗌冫準(zhǔn)蠞舛鹊木骸?/span>
特點(diǎn)：該方法實(shí)際上為目視比濁法，使用肉眼觀察濁度，誤差較大。
單位：mcf（即麥?zhǔn)蠞岫葐挝唬?/span>
3.2麥?zhǔn)媳葷醿x
是一種采用麥?zhǔn)媳葷岱ǖ淖詣?dòng)化分析儀器，以其靈敏、準(zhǔn)確、快捷的優(yōu)點(diǎn)逐漸取代人工法成為細(xì)菌濁度測定的主要工具。麥?zhǔn)媳葷醿x測量細(xì)菌溶液樣品并直接顯示麥?zhǔn)蠁挝粷岫戎?，根?jù)通用麥?zhǔn)蠁挝粷岫戎蹬c細(xì)菌數(shù)的關(guān)系即可換算出細(xì)菌濃度。
特點(diǎn)：簡單快捷，但只能檢測含有大量細(xì)菌的懸浮液，得出相對的細(xì)菌數(shù)目，對顏色太深的樣品，不能用此法測定。
單位：mcf（即麥?zhǔn)蠞岫葐挝唬?/span>
3.3光電比濁法
當(dāng)光束通過懸濁液時(shí), 由于被散射或吸收而降低其透過量，細(xì)菌懸濁液的濃度在一定范圍內(nèi)與光密度成正比，與透光度成反比，這就是光電比濁法的依據(jù)。常用的有分光光度計(jì)法。
特點(diǎn)：此方法簡單快捷，但只能檢測含有大量細(xì)菌的懸浮液，得出相對的細(xì)菌數(shù)目，對顏色太深的樣本，不能用此方法。
單位：OD值（光密度）。
4. 測定重量法
此法分為是干重法和濕重法。此法分為濕重法和干重法。濕重法系單位體積培養(yǎng)物經(jīng)離心后將濕菌體進(jìn)行稱重；干重法系單位體積培養(yǎng)物經(jīng)離心后，以清水洗凈放人干燥器加熱烘干，使之失去水分然后稱重。
特點(diǎn)：此法適于菌體濃度較高的樣品，是測定絲狀真菌生長量的常用方法。
單位：mg/mL
5、測定細(xì)胞總氮量或總碳量
氮、碳是細(xì)胞的主要成分，含量較穩(wěn)定，測定氮、碳的含量可以推知細(xì)胞的質(zhì)量。
特點(diǎn)：此法適于細(xì)胞濃度較高的樣品。
6、顏色改變單位法（colour change unit,簡稱CCU）
ccu是顏色改變單位，以微生物在培養(yǎng)基中的代謝活力為指標(biāo)，根據(jù)培養(yǎng)基顏色的改變來計(jì)數(shù)微生物數(shù)量的單位。
以解脲脲原體為例：
1、取12只無菌試管，每一管裝1.8mL解脲脲原體培養(yǎng)基。
2、在管加入0.2mL待測解脲脲原體菌液，充分混勻，從中吸取0.2mL加入第二管，依次類推，10倍梯度稀釋，一直到末一管。
3、37℃培養(yǎng)，以培養(yǎng)基顏色改變的末一管作為待測菌液的CCU，也就是支原體的大代謝活力，比如第六管出現(xiàn)顏色改變，他的相對濃度就是10的6次方CCU/mL，即106CCU/mL。
特點(diǎn)：這種方法通常用于很小，用一般的比濁法無法計(jì)數(shù)的微生物，比如支原體等，因?yàn)橹гw的液體培養(yǎng)物是完全透明的，呈現(xiàn)為清亮透明紅色，因此無法用比濁法來計(jì)數(shù)；而由于支原體固體培養(yǎng)很困難，用cfu法也不容易計(jì)數(shù)，所以需要用特殊的計(jì)數(shù)方法，即CCU法。
單位：ccu/mL
