古朵闡述：腫瘤壞死因子ELISA試劑盒的細節(jié)處理

  由于腫瘤壞死因子ELISA試劑盒只能檢測可溶性蛋白的含量，所以應保證所有樣本均為澄清的液體，沉淀或懸浮物都應離心去除。為了保證檢測的準確性，保存于-20℃或-80℃的樣本在1~6個月內(nèi)檢測;4℃保存的樣本應在1周內(nèi)進行檢測。另外，還應保證樣本不含NaN3，因為NaN3會抑制HRP的活性，從而導致假陰性的結果。

  細胞裂解液的細節(jié)處理：

  1. 吸去培養(yǎng)板內(nèi)的培養(yǎng)基，用胰酶消化細胞，加適量培養(yǎng)基將細胞從培養(yǎng)板上吹下來。懸浮細胞可省略。

  2. 收集細胞懸液，1000×g離心10min，棄去培養(yǎng)基，用預冷的PBS潤洗3次。

  3. 加入適量的預冷PBS或細胞裂解液(臨用前加入蛋白酶抑制劑)重懸細胞。通常6孔板一個孔的 細胞量需要150~250μL PBS重懸。

  4. 將樣品放入-20℃或-80℃，使樣品冷凍，再放室溫解凍樣品，反復凍融幾次，使細胞充分裂解。也可將樣品進行超聲破碎，以達到裂解的目的。

  5. 4℃10000×g離心10min，除去細胞碎片，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反復凍融。

  ·腫瘤壞死因子ELISA試劑盒組織勻漿液的細節(jié)處理：

  1. 將組織樣本用PBS(0.01M, PH 7.4)沖洗，洗去組織表面殘留的血液或雜質。

  2. 將組織塊稱重，記錄后剪碎，碎塊應盡量小，便于勻漿得充分

  3. 將組織按一定的比例加入預冷的PBS(臨用前加入蛋白酶抑制劑)勻漿，勻漿時置于冰上或冰浴中。

  4. 吸取勻漿液到離心管，4℃5000×g離心5~10min，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反復凍融。

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