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古朵闡述:影響胎牛血清質(zhì)量的幾大因素

發(fā)布時(shí)間:2023-04-19瀏覽次數(shù):779返回列表

  市場(chǎng)上的胎牛血清種類(lèi)繁多,魚(yú)龍混雜,很多科研工作者,特別是剛接觸細(xì)胞培養(yǎng)的人,難以分辨血清質(zhì)量的優(yōu)劣。本人根據(jù)十多年來(lái)血清生產(chǎn)銷(xiāo)售的經(jīng)驗(yàn),總結(jié)如下:

  一、外觀

  拿到血清,zui先接觸的是血清外觀,對(duì)于缺少細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)的人來(lái)說(shuō),外觀的判斷尤為重要

  1、顏色

  根據(jù)血紅蛋白含量的不同,胎牛血清可表現(xiàn)出黃色或紅色,我國(guó)的細(xì)胞培養(yǎng)用血清標(biāo)準(zhǔn)是不高于20mg/dl,實(shí)際上,血紅蛋白含量的高低對(duì)血清并無(wú)直接影響,這個(gè)指標(biāo)的意義在于能體現(xiàn)出采血過(guò)程的嚴(yán)謹(jǐn)規(guī)范程度,良好的操作能降低血清的溶血。

  國(guó)產(chǎn)血清的采血點(diǎn)很分散,大多是由屠戶采血后馬上離心收集,所以很少會(huì)有溶血,表現(xiàn)出明亮的蠟黃色,當(dāng)然,國(guó)產(chǎn)血清也很少有標(biāo)準(zhǔn)意義上的胎牛血清。

  進(jìn)口胎牛血清或多或少總有點(diǎn)溶血,因?yàn)檎嬲奶ヅQ迥δ懿?,紅細(xì)胞容易破裂。

  總的來(lái)說(shuō),國(guó)產(chǎn)的血清呈現(xiàn)出蠟黃。進(jìn)口的血清,質(zhì)量zui好的呈現(xiàn)出談黃、微紅色,如Gibco 16000,差點(diǎn)的呈現(xiàn)出橘紅色或鮮紅色。當(dāng)然,熱滅活血清或保存不當(dāng)?shù)难?,由于血紅蛋白的破壞氧化,會(huì)呈現(xiàn)出暗紅,甚至咖啡色。

  2、沉淀

  很多血清客戶,會(huì)發(fā)現(xiàn)進(jìn)口血清有沉淀,從而懷疑血清的質(zhì)量問(wèn)題,這是沒(méi)有根據(jù)的。

  血清中的沉淀是由纖維蛋白的凝聚產(chǎn)生,對(duì)血清質(zhì)量沒(méi)有任何影響,沉淀的產(chǎn)生原因很多,和廠家的加工生產(chǎn)方式密切相關(guān)。

  國(guó)產(chǎn)的血清,大多來(lái)自北方,由于價(jià)格低廉,保存環(huán)境都不好,從采血、冷凍、運(yùn)輸?shù)缴a(chǎn)會(huì)經(jīng)過(guò)多次凍融,每次凍融過(guò)程,就會(huì)析出部分纖維蛋白沉淀,這樣,血清成品過(guò)濾后看起來(lái)反而加的“干凈”,很少有沉淀產(chǎn)生。

  進(jìn)口的胎牛血清,過(guò)濾分裝前很少會(huì)反復(fù)凍融,生產(chǎn)后的成品也是清澈的,但隨著時(shí)間的推移,血清中的大量纖維蛋白會(huì)析出形成沉淀。當(dāng)然,進(jìn)口的新生牛血清,一般牛齡都在2周左右,血清中的各種蛋白含量明顯偏高,生產(chǎn)后血清可能會(huì)渾濁,甚至有大量沉淀。

  當(dāng)然,購(gòu)買(mǎi)回來(lái)的血清都是冰凍狀態(tài),使用時(shí)需要融化,融化過(guò)程zui好在溫度較低的狀態(tài)下慢慢進(jìn)行,否則沉淀相對(duì)較多,雖然沉淀并不直接影響血清的質(zhì)量,但對(duì)細(xì)胞的顯微觀察有一定的阻礙。

  3、澄清度

  進(jìn)口胎牛血清由于蛋白和脂類(lèi)等物質(zhì)含量低,表現(xiàn)為稀薄、清淡,而國(guó)產(chǎn)血清,因?yàn)榻^大多數(shù)是新生牛血清,相對(duì)而言加粘稠,顏色略深,這對(duì)于初步接觸血清的人很難判斷,但把兩者進(jìn)行對(duì)比,可容易分辨。

  二、主要技術(shù)指標(biāo)

  目前國(guó)內(nèi)血清的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)是2005版的《中華人民共和國(guó)藥典》,主要指標(biāo)有以下幾點(diǎn):

  1、內(nèi)毒素

  標(biāo)準(zhǔn)為不高于5EU/ml。內(nèi)毒素是細(xì)菌破碎后細(xì)胞壁的成分,因此內(nèi)毒素含量的高低可表現(xiàn)出采血到生產(chǎn)一系列過(guò)程中的無(wú)菌操作情況。目前,國(guó)產(chǎn)血清基本都能達(dá)到這一要求,很多進(jìn)口胎牛血清內(nèi)毒素含量反而高,如Gibco 26140,只要求不高于50EU/ml,高出我國(guó)標(biāo)準(zhǔn)10倍,即使是16000,也要10EU/ml,血清質(zhì)量也未見(jiàn)影響??梢?jiàn),內(nèi)毒素含量偏高不影響質(zhì)量,除非含量極高,預(yù)示著已經(jīng)污染。

  2、總蛋白含量

  胎牛血清一般范圍是30-40mg/ml,數(shù)值偏高,說(shuō)明采血的牛齡偏大,不是胎牛,數(shù)值偏低,表明血清可能摻水了。

  3、血紅蛋白

  標(biāo)準(zhǔn)為不高于20mg/dl,顏色越紅,數(shù)值越高,反之,數(shù)值越低。

  4、pH

  國(guó)產(chǎn)血清,大多高于7.5,進(jìn)口胎牛血清,大多低于7.5,具體原因未知,可能和牛齡有關(guān),這也能用來(lái)初步鑒別血清的來(lái)源。

  5、微生物

  包括細(xì)菌、霉菌、支原體、噬菌體、各類(lèi)病原性病毒等。隨著國(guó)內(nèi)血清廠家生產(chǎn)條件的改善提高,細(xì)菌、霉菌等“大型”微生物幾乎能控制,支原體經(jīng)過(guò)0.1um過(guò)濾,大多也能清除。大腸桿菌噬菌體的污染還是比較嚴(yán)重的,主要是生產(chǎn)環(huán)境過(guò)程中帶入,又無(wú)法過(guò)濾,很難徹底清除,但對(duì)血清質(zhì)量影響不大。病原性病毒,特別是BVDV,在國(guó)產(chǎn)血清中幾乎90%以上都存在,這類(lèi)微生物是影響國(guó)產(chǎn)血清質(zhì)量的重要因素之一,而進(jìn)口胎牛血清中基本都控制的很好。

  6、免疫球蛋白

  國(guó)產(chǎn)血清的只是定性檢測(cè),結(jié)果也很不準(zhǔn)確,進(jìn)口胎牛血清大多定量檢測(cè)。免疫球蛋白的數(shù)值能完全體現(xiàn)出采血的時(shí)的牛齡情況,國(guó)產(chǎn)血清,基本都是新生牛的,血清中容易產(chǎn)生IgM,IgG的含量也偏高,進(jìn)口胎牛血清,不含IgM,IgG的含量也較低。

  7、其它

  不管是國(guó)產(chǎn)還是進(jìn)口血清,都是不測(cè)抗生素的(無(wú)四環(huán)素胎牛血清除外)。國(guó)外,抗生素的使用很?chē)?yán)格,用量也很少,每頭奶牛的產(chǎn)品包括血清都可以溯源的,因此可以做到胎牛血清中不含抗生素或含量極低;國(guó)內(nèi),抗生素的濫用已成了普遍現(xiàn)象,血清中殘留很高,對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)極為不利,這是國(guó)產(chǎn)血清質(zhì)量差的根本原因。

  三、血源

  市場(chǎng)上的血清血源主要分為中國(guó)、北美、南美和澳洲。

  1、國(guó)產(chǎn)血清質(zhì)量差,這是公認(rèn)的,主要原因并不是生產(chǎn)廠家的責(zé)任,而是天然環(huán)境差和抗生素的大量使用。國(guó)內(nèi)環(huán)境污染嚴(yán)重,同時(shí)飼養(yǎng)過(guò)程中抗生素極其濫用,有毒有害物質(zhì)會(huì)大量殘留在血清中,zui終不利于細(xì)胞的生長(zhǎng)。

  2、南美血清,來(lái)源很多,如Bioind的巴拿馬、Gibco的烏拉圭、巴西等,這些血清由于采血的不可控性,質(zhì)量參差不齊,當(dāng)然,相對(duì)于國(guó)內(nèi)血清來(lái)說(shuō)好的多。另外,國(guó)內(nèi)銷(xiāo)售的南美血清大多顏色鮮紅,如Bioind、Gibco、Hylone等品牌,但阿根廷的血清例外,這可能和各國(guó)的采血、生產(chǎn)工藝有關(guān)。

  3、北美血清,主要來(lái)自美國(guó)和加拿大,如Hclone的SH30396、SH30070、SH30071、Gibco的16000-044、26140-079等。這類(lèi)血清,等級(jí)越高的顏色越淡,表現(xiàn)為淡黃中帶一點(diǎn)微紅,SH30070和SH30396對(duì)比就很明顯,特級(jí)胎牛血清基本就能進(jìn)行干細(xì)胞培養(yǎng)。北美血清還有一個(gè)顯著特點(diǎn)就是每瓶血清都能溯源,這對(duì)一些大型的疫苗廠、藥廠尤為重要。

  4、澳洲血清,來(lái)源主要是新西蘭和澳大利亞,這是在北美血清禁運(yùn)之后進(jìn)入中國(guó)市場(chǎng)的,一般不具有溯源功能,由于生產(chǎn)、運(yùn)輸?shù)仍?,價(jià)格相對(duì)來(lái)說(shuō)比較貴。拿Gibco的10099和16000相比較,后者質(zhì)量等級(jí)高,顏色淡,性?xún)r(jià)比高。

  市場(chǎng)上的胎牛血清種類(lèi)繁多,魚(yú)龍混雜,很多科研工作者,特別是剛接觸細(xì)胞培養(yǎng)的人,難以分辨血清質(zhì)量的優(yōu)劣。本人根據(jù)十多年來(lái)血清生產(chǎn)銷(xiāo)售的經(jīng)驗(yàn),總結(jié)如下:

  一、外觀

  拿到血清,zui先接觸的是血清外觀,對(duì)于缺少細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)的人來(lái)說(shuō),外觀的判斷尤為重要

  1、顏色

  根據(jù)血紅蛋白含量的不同,胎牛血清可表現(xiàn)出黃色或紅色,我國(guó)的細(xì)胞培養(yǎng)用血清標(biāo)準(zhǔn)是不高于20mg/dl,實(shí)際上,血紅蛋白含量的高低對(duì)血清并無(wú)直接影響,這個(gè)指標(biāo)的意義在于能體現(xiàn)出采血過(guò)程的嚴(yán)謹(jǐn)規(guī)范程度,良好的操作能降低血清的溶血。

  國(guó)產(chǎn)血清的采血點(diǎn)很分散,大多是由屠戶采血后馬上離心收集,所以很少會(huì)有溶血,表現(xiàn)出明亮的蠟黃色,當(dāng)然,國(guó)產(chǎn)血清也很少有標(biāo)準(zhǔn)意義上的胎牛血清。

  進(jìn)口胎牛血清或多或少總有點(diǎn)溶血,因?yàn)檎嬲奶ヅQ迥δ懿?,紅細(xì)胞容易破裂。

  總的來(lái)說(shuō),國(guó)產(chǎn)的血清呈現(xiàn)出蠟黃。進(jìn)口的血清,質(zhì)量zui好的呈現(xiàn)出談黃、微紅色,如Gibco 16000,差點(diǎn)的呈現(xiàn)出橘紅色或鮮紅色。當(dāng)然,熱滅活血清或保存不當(dāng)?shù)难?,由于血紅蛋白的破壞氧化,會(huì)呈現(xiàn)出暗紅,甚至咖啡色。

  2、沉淀

  很多血清客戶,會(huì)發(fā)現(xiàn)進(jìn)口血清有沉淀,從而懷疑血清的質(zhì)量問(wèn)題,這是沒(méi)有根據(jù)的。

  血清中的沉淀是由纖維蛋白的凝聚產(chǎn)生,對(duì)血清質(zhì)量沒(méi)有任何影響,沉淀的產(chǎn)生原因很多,和廠家的加工生產(chǎn)方式密切相關(guān)。

  國(guó)產(chǎn)的血清,大多來(lái)自北方,由于價(jià)格低廉,保存環(huán)境都不好,從采血、冷凍、運(yùn)輸?shù)缴a(chǎn)會(huì)經(jīng)過(guò)多次凍融,每次凍融過(guò)程,就會(huì)析出部分纖維蛋白沉淀,這樣,血清成品過(guò)濾后看起來(lái)反而加的“干凈”,很少有沉淀產(chǎn)生。

  進(jìn)口的胎牛血清,過(guò)濾分裝前很少會(huì)反復(fù)凍融,生產(chǎn)后的成品也是清澈的,但隨著時(shí)間的推移,血清中的大量纖維蛋白會(huì)析出形成沉淀。當(dāng)然,進(jìn)口的新生牛血清,一般牛齡都在2周左右,血清中的各種蛋白含量明顯偏高,生產(chǎn)后血清可能會(huì)渾濁,甚至有大量沉淀。

  當(dāng)然,購(gòu)買(mǎi)回來(lái)的血清都是冰凍狀態(tài),使用時(shí)需要融化,融化過(guò)程zui好在溫度較低的狀態(tài)下慢慢進(jìn)行,否則沉淀相對(duì)較多,雖然沉淀并不直接影響血清的質(zhì)量,但對(duì)細(xì)胞的顯微觀察有一定的阻礙。

  3、澄清度

  進(jìn)口胎牛血清由于蛋白和脂類(lèi)等物質(zhì)含量低,表現(xiàn)為稀薄、清淡,而國(guó)產(chǎn)血清,因?yàn)榻^大多數(shù)是新生牛血清,相對(duì)而言加粘稠,顏色略深,這對(duì)于初步接觸血清的人很難判斷,但把兩者進(jìn)行對(duì)比,可容易分辨。

  二、主要技術(shù)指標(biāo)

  目前國(guó)內(nèi)血清的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)是2005版的《中華人民共和國(guó)藥典》,主要指標(biāo)有以下幾點(diǎn):

  1、內(nèi)毒素

  標(biāo)準(zhǔn)為不高于5EU/ml。內(nèi)毒素是細(xì)菌破碎后細(xì)胞壁的成分,因此內(nèi)毒素含量的高低可表現(xiàn)出采血到生產(chǎn)一系列過(guò)程中的無(wú)菌操作情況。目前,國(guó)產(chǎn)血清基本都能達(dá)到這一要求,很多進(jìn)口胎牛血清內(nèi)毒素含量反而高,如Gibco 26140,只要求不高于50EU/ml,高出我國(guó)標(biāo)準(zhǔn)10倍,即使是16000,也要10EU/ml,血清質(zhì)量也未見(jiàn)影響??梢?jiàn),內(nèi)毒素含量偏高不影響質(zhì)量,除非含量極高,預(yù)示著已經(jīng)污染。

  2、總蛋白含量

  胎牛血清一般范圍是30-40mg/ml,數(shù)值偏高,說(shuō)明采血的牛齡偏大,不是胎牛,數(shù)值偏低,表明血清可能摻水了。

  3、血紅蛋白

  標(biāo)準(zhǔn)為不高于20mg/dl,顏色越紅,數(shù)值越高,反之,數(shù)值越低。

  4、pH

  國(guó)產(chǎn)血清,大多高于7.5,進(jìn)口胎牛血清,大多低于7.5,具體原因未知,可能和牛齡有關(guān),這也能用來(lái)初步鑒別血清的來(lái)源。

  5、微生物

  包括細(xì)菌、霉菌、支原體、噬菌體、各類(lèi)病原性病毒等。隨著國(guó)內(nèi)血清廠家生產(chǎn)條件的改善提高,細(xì)菌、霉菌等“大型”微生物幾乎能控制,支原體經(jīng)過(guò)0.1um過(guò)濾,大多也能清除。大腸桿菌噬菌體的污染還是比較嚴(yán)重的,主要是生產(chǎn)環(huán)境過(guò)程中帶入,又無(wú)法過(guò)濾,很難徹底清除,但對(duì)血清質(zhì)量影響不大。病原性病毒,特別是BVDV,在國(guó)產(chǎn)血清中幾乎90%以上都存在,這類(lèi)微生物是影響國(guó)產(chǎn)血清質(zhì)量的重要因素之一,而進(jìn)口胎牛血清中基本都控制的很好。

  6、免疫球蛋白

  國(guó)產(chǎn)血清的只是定性檢測(cè),結(jié)果也很不準(zhǔn)確,進(jìn)口胎牛血清大多定量檢測(cè)。免疫球蛋白的數(shù)值能完全體現(xiàn)出采血的時(shí)的牛齡情況,國(guó)產(chǎn)血清,基本都是新生牛的,血清中容易產(chǎn)生IgM,IgG的含量也偏高,進(jìn)口胎牛血清,不含IgM,IgG的含量也較低。

  7、其它

  不管是國(guó)產(chǎn)還是進(jìn)口血清,都是不測(cè)抗生素的(無(wú)四環(huán)素胎牛血清除外)。國(guó)外,抗生素的使用很?chē)?yán)格,用量也很少,每頭奶牛的產(chǎn)品包括血清都可以溯源的,因此可以做到胎牛血清中不含抗生素或含量極低;國(guó)內(nèi),抗生素的濫用已成了普遍現(xiàn)象,血清中殘留很高,對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)極為不利,這是國(guó)產(chǎn)血清質(zhì)量差的根本原因。

  三、血源

  市場(chǎng)上的血清血源主要分為中國(guó)、北美、南美和澳洲。

  1、國(guó)產(chǎn)血清質(zhì)量差,這是公認(rèn)的,主要原因并不是生產(chǎn)廠家的責(zé)任,而是天然環(huán)境差和抗生素的大量使用。國(guó)內(nèi)環(huán)境污染嚴(yán)重,同時(shí)飼養(yǎng)過(guò)程中抗生素極其濫用,有毒有害物質(zhì)會(huì)大量殘留在血清中,zui終不利于細(xì)胞的生長(zhǎng)。

  2、南美血清,來(lái)源很多,如Bioind的巴拿馬、Gibco的烏拉圭、巴西等,這些血清由于采血的不可控性,質(zhì)量參差不齊,當(dāng)然,相對(duì)于國(guó)內(nèi)血清來(lái)說(shuō)好的多。另外,國(guó)內(nèi)銷(xiāo)售的南美血清大多顏色鮮紅,如Bioind、Gibco、Hylone等品牌,但阿根廷的血清例外,這可能和各國(guó)的采血、生產(chǎn)工藝有關(guān)。

  3、北美血清,主要來(lái)自美國(guó)和加拿大,如Hclone的SH30396、SH30070、SH30071、Gibco的16000-044、26140-079等。這類(lèi)血清,等級(jí)越高的顏色越淡,表現(xiàn)為淡黃中帶一點(diǎn)微紅,SH30070和SH30396對(duì)比就很明顯,特級(jí)胎牛血清基本就能進(jìn)行干細(xì)胞培養(yǎng)。北美血清還有一個(gè)顯著特點(diǎn)就是每瓶血清都能溯源,這對(duì)一些大型的疫苗廠、藥廠尤為重要。

  4、澳洲血清,來(lái)源主要是新西蘭和澳大利亞,這是在北美血清禁運(yùn)之后進(jìn)入中國(guó)市場(chǎng)的,一般不具有溯源功能,由于生產(chǎn)、運(yùn)輸?shù)仍?,價(jià)格相對(duì)來(lái)說(shuō)比較貴。拿Gibco的10099和16000相比較,后者質(zhì)量等級(jí)高,顏色淡,性?xún)r(jià)比高。