古朵闡述：細(xì)胞分離液的使用、優(yōu)點(diǎn)及注意事項(xiàng)

  細(xì)胞分離液是一種經(jīng)過聚y烯c咯烷酮處理過的硅膠顆粒，經(jīng)過高速離心后可形成連續(xù)密度梯度，由于Percoll擴(kuò)散常數(shù)低，所形成的梯度十分穩(wěn)定。Percoll細(xì)胞分離液采用預(yù)先形成的密度梯度時(shí)可在低離心力(200～1000g)于數(shù)分至數(shù)十分鐘內(nèi)達(dá)到滿意的細(xì)胞分離結(jié)果。此外，Percoll細(xì)胞分離液不穿透生物膜，對(duì)細(xì)胞害，因此廣泛用于分離細(xì)胞、亞細(xì)胞成分、細(xì)菌及病毒，還可將受損細(xì)胞及其碎片與完好的活細(xì)胞分離。常用于分離和傳話植物原生質(zhì)體、核、葉綠體、和線粒體。

  細(xì)胞分離液的配置與使用：

  1、不同濃度(密度)Percoll分離液的制備: 先用9份分離液與1份8.5% NaCl或1.5MPBS混合達(dá)到生理性滲透壓，然后用生理溶液(0.85% NaCl或0.15M PBS)稀釋到所需濃度。

  2、不連續(xù)密度梯度Percoll層的制備: 先將試管壁用牛血清濕潤，除去多余血清，這種預(yù)處理可使逐層疊加的液平穩(wěn)沿管壁流下，使形成滿意的界面。在制備過程中一般用長針頭注射器從高密度向低密度逐層放置，有時(shí)相鄰兩層Percoll比重相差不大時(shí)，可將Percoll液放入注射器中，小針頭斜面緊貼管壁，任其自然慢慢流下。

  3、裝樣：樣品體積和細(xì)胞濃度根據(jù)不同細(xì)胞而異，一般加樣體積不宜過大，細(xì)胞濃度也不可過高，否則會(huì)影響細(xì)胞的分離和回收。

  4、離心：一般采用離心力為400g，時(shí)間20～25min。由于多層Percoll之間密度差別不大，因此離心機(jī)加速、降速時(shí)要慢，要平穩(wěn)。

  5、取樣：當(dāng)所要分離的細(xì)胞絕大部分在兩層的界面時(shí)，可逐層去除Percoll液后收集界面部位的細(xì)胞;有時(shí)大部分細(xì)胞位于Percoll層中,則需要逐層收集。收獲含有Percoll液的細(xì)胞經(jīng)2次洗滌后可供培養(yǎng)或檢測用。

  細(xì)胞分離液的優(yōu)點(diǎn)：

  滲透性低、不穿透細(xì)胞、密度高、害，是目前較理想的介質(zhì)。Percoll密度梯度離心已被多次成功地用于動(dòng)物細(xì)胞及其細(xì)胞器的分離，純化了包括人血液細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、紅血球細(xì)胞、白血球細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、肝細(xì)胞等在內(nèi)的十余種動(dòng)物細(xì)胞。

  細(xì)胞分離液注意事項(xiàng)：

  1、細(xì)胞分離液在儲(chǔ)存及孵育過程中避免將實(shí)際保留在強(qiáng)光中。

  2、試劑瓶蓋需蓋緊，防止蒸發(fā)和污染。

  細(xì)胞分離液上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品，勵(lì)志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠(yuǎn)銷多個(gè)國家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求”的經(jīng)營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準(zhǔn)則、以市場需求為導(dǎo)向，不斷開發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務(wù)質(zhì)量”的方針。