細(xì)胞爬片HE染色方法

  一、實驗原理：

  蘇木素(Hematoxylin)-伊紅(Eosin)染色法，簡稱HE染色法。

  HE染色法采用兩種染料即堿性染料蘇木素和酸性染料伊紅分別于細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)發(fā)生作用，使細(xì)胞的微細(xì)結(jié)構(gòu)通過顏色而改變它的折光率，從而在光鏡下能清晰地呈現(xiàn)出細(xì)胞圖像。該染色過程既有化學(xué)反應(yīng)，又有物理作用參與。從化學(xué)反應(yīng)看，組織細(xì)胞內(nèi)含有酸性物質(zhì)和堿性物質(zhì)，細(xì)胞的酸性物質(zhì)與堿性染料的陽離子結(jié)合，而細(xì)胞核的堿性物質(zhì)與酸性染料的陰離子結(jié)合，使其中酸性細(xì)胞核被堿性的蘇木素染成藍(lán)色，而堿性的胞漿被酸性染料伊紅染成紅色。其結(jié)果胞核呈藍(lán)色，胞漿呈紅色。從物理現(xiàn)象看，主要有吸附、吸收之說。HE染色提供良好的核漿對比染色，是細(xì)胞化學(xué)染色zui常用的一種方法。

  二、實驗用品：

  (1)固定液：常用95%乙醇和冰丙酮

  (2)蘇木精染液：稱取蘇木精粉0.5g，銨礬24g溶解于70ml蒸餾水中，然后取NaIO 31g，水5ml，再加入干油30ml和冰醋酸2ml，混合均勻，濾紙過濾，備用。

  (3)伊紅染液：稱取0.5g水溶性伊紅染液，溶于100ml蒸餾水中。

  (4)*乙醇溶液：用75%乙醇配制1%鹽酸。

  (5)系列濃度的乙醇、二甲苯、中性樹膠。

  (6)培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、*、蓋玻片、載玻片、顯微鏡。

  三、實驗步驟：

  (1)樣品制備：對于貼壁生長細(xì)胞，*消化，調(diào)整細(xì)胞濃度約1×105/ml，滴加于蓋玻片上(置于6孔板中)，培養(yǎng)相應(yīng)時間后，取出細(xì)胞爬片，用PBS洗滌3次。

  (2)樣品固定：95%乙醇固定20min，PBS洗滌2次，每次1min。

  (3)染核：蘇木素染液染色2-3min，自來水洗滌。

  (4)分色：鏡下觀察，若細(xì)胞核染色過深，用1%鹽酸酒精溶液分色數(shù)秒，自來水洗滌。

  (5)染胞質(zhì)：浸入伊紅染液染色1min，自來水洗滌。 吹干或自然晾干細(xì)胞爬片后，中性樹膠封片。 若細(xì)胞用4%多聚甲醛固定，則染色時間相應(yīng)延長，蘇木素染色12-15min，伊紅5min即可。

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