小鼠白細胞介素17(IL-17)試劑盒操作步驟

  1. 標(biāo)準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

  120pg/ml5號標(biāo)準品150μl的原倍標(biāo)準品加入150μl標(biāo)準品稀釋液

  60pg/ml4號標(biāo)準品150μl的5號標(biāo)準品加入150μl標(biāo)準品稀釋液

  30pg/ml3號標(biāo)準品150μl的4號標(biāo)準品加入150μl標(biāo)準品稀釋液

  15pg/ml2號標(biāo)準品150μl的3號標(biāo)準品加入150μl標(biāo)準品稀釋液

  7.5pg/ml1號標(biāo)準品150μl的2號標(biāo)準品加入150μl標(biāo)準品稀釋液

  2. 加樣：分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同)、標(biāo)準孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

  3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

  4. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

  5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

  6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

  7. 溫育：操作同3。

  8. 洗滌：操作同5。

  9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

  10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。

  11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

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