人組織型纖溶酶原激活劑(t-PA)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)說明書

  實(shí)驗(yàn)類型：ELISA，酶聯(lián)免疫吸附測定，雙抗夾心法。

  應(yīng)用范圍：免疫學(xué)檢驗(yàn)，血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本。

  用途

  該試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿或其他相關(guān)生物液體中濃度。

  檢測原理

  本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法。用抗體包被于酶標(biāo)板上，實(shí)驗(yàn)時(shí)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中的抗原會與包被抗體結(jié)合，游離的成分被洗去。依次加入生物素化的抗體和辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素?？贵w與結(jié)合在包被抗體上的抗原結(jié)合、生物素與親和素特異性結(jié)合而形成免疫復(fù)合物，游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB)，TMB在辣根過氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍(lán)色，加終止液后變成黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長處測OD值，抗原濃度與OD450值之間呈正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中指標(biāo)的濃度。

  反應(yīng)類型夾心法

  規(guī)格96T

  反應(yīng)時(shí)間4.5h

  反應(yīng)性通用

  檢測方法Colormetric

  靈敏度檢測下線除以10

  樣本體積100μL

  樣本類型血清、血漿或其他相關(guān)生物液體

  特異性可檢測樣本中的指標(biāo),且與其它相關(guān)蛋白無明顯交叉反應(yīng)

  重復(fù)性板內(nèi)，板間變異系數(shù)均<10%

  樣品活化方法

  生物樣品中的通常以無活性的形式存在，在檢測指標(biāo)活性前必須進(jìn)行活化處理。

  活化方法如下：

  血清、血漿： 280 μL標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液中加入40 μL樣品，混勻，加入40 μL活化試劑1，室溫孵育10分鐘。再加入40 μL活化試劑2，混勻后立即檢測。

  注意：樣品被稀釋了10倍!

  細(xì)胞培養(yǎng)上清：20 μL標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液中加入100 μL樣品，混勻，加入40 μL活化試劑1，室溫孵育10分鐘。再加入40 μL活化試劑2，混勻后立即檢測。

  注意：樣品被稀釋了2倍!

  組織勻漿：1960 μL標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液中加入40 μL樣品，混勻后檢測。

  注意：樣品被稀釋了50倍!

  度

  板內(nèi)度:低濃度樣本,中濃度樣本和高濃度樣本分別在1塊板子上檢測20次。板間度:低濃度樣本,中濃度樣本和高濃度樣本分別在3塊板子上檢測20次。 批內(nèi)變異系數(shù)批間變異系數(shù)

  樣本123123

  數(shù)量202020202020

  平均值( MERGEFIELD 單位ng/mL)0.411.074.960.471.254.24

  標(biāo)準(zhǔn)差0.020.050.220.030.060.2

  變異系數(shù) (%)4.884.674.436.384.84.72

  回收率

  分別往5個不同樣本中添加已知濃度的目標(biāo)蛋白，做回收實(shí)驗(yàn)，得出回收率范圍和平均回收率。樣本類型回收率范圍 (%)平均回收率 (%)

  血清(n=5)94-110102

  血漿(EDTA)(n=5)90-10296

  細(xì)胞上清(n=5)95-10698

  線性

  分別往5個樣本中添加已知濃度的目標(biāo)蛋白，做回收實(shí)驗(yàn)，得出回收率范圍及平均回收率。將5個樣本分別稀釋2倍，4倍，8倍，16倍做回收實(shí)驗(yàn)，得出回收率范圍及平均回收率。 血清(n=5)血漿(EDTA)(n=5)細(xì)胞上清(n=5)

  1:2回收率范圍(%)99-10895-10592-104

  平均回收率(%)10510297

  1:4回收率范圍(%)95-10990-10097-105

  平均回收率(%)10296100

  1:8回收率范圍(%)89-10389-10496-108

  平均回收率(%)9797102

  1:16回收率范圍(%)88-10298-10892-105

  平均回收率(%)94104100

  試劑盒組成及保存

  未拆封的試劑盒可在4℃保存一周;如果一周以后才使用試劑盒，請拆開試劑盒按照下表中的條件分別保存各組分。試劑盒組成48孔配置96孔配置

  說明書1份1份

  封板膜2片2片

  密封袋1個1個

  酶標(biāo)包被板1×481×96

  標(biāo)準(zhǔn)品0.3ml×6管0.3ml×6管

  酶標(biāo)試劑5 ml×1瓶10 ml×1瓶

  樣品稀釋液3 ml×1瓶6 ml×1瓶

  顯色劑A液3 ml×1瓶6 ml×1瓶

  顯色劑B液3 ml×1瓶6 ml×1瓶

  終止液3 ml×1瓶6 ml×1瓶

  20×濃縮洗滌液15ml×1瓶25ml×1瓶

  試劑盒組成48孔配置96孔配置

  說明書1份1份

  封板膜2片2片

  密封袋1個1個

  說明：所有試劑瓶蓋須旋緊以防止蒸發(fā)和微生物的污染。

  試劑體積以實(shí)際發(fā)貨版說明書為準(zhǔn)。相關(guān)試劑在分裝時(shí)會比標(biāo)簽上標(biāo)明的體積稍多一些，請?jiān)谑褂脮r(shí)量取而非直接倒出。

  操作步驟

  1. 標(biāo)準(zhǔn)品的加樣：設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;。

  2. 加樣：分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

  3. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑100μl，空白孔除外。

  4. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。

  5. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。

  6. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

  7. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

  8. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

  9. 測定：以空白孔調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

  試驗(yàn)所需自備物品

  1. 酶標(biāo)儀(450nm波長濾光片)

  2. 移液器，EP管及一次性吸頭：0.5-10 μL, 2-20 μL, 20-200 μL, 200-1000 μL

  3. 37℃恒溫箱，雙蒸水或去離子水

  4. 吸水紙

  人組織型纖溶酶原激活劑試劑盒 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品，勵志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠(yuǎn)銷多個國家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準(zhǔn)則、以市場需求為導(dǎo)向，不斷開發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務(wù)質(zhì)量"的方針。