知識分享：常用染料和試劑的配制與使用

  1. 碘-硫酸法

  植物細(xì)胞細(xì)胞壁的主要成分是纖維素，纖維素被硫酸水解后，遇碘呈藍(lán)色反應(yīng)。因此用碘-硫酸法可鑒定細(xì)胞壁的成分。

  試劑配制方法：

  1% 碘液 將1.5 克碘化鉀溶于100 毫升的蒸餾水中，待*溶解后，加入1 克碘，震蕩溶解。

  66.5% 硫酸 7 份濃硫酸加入3 份蒸餾水配制而成。配制時(shí)要將濃硫酸慢慢地加入水中，并不斷地用玻璃棒攪拌，否則會因急劇發(fā)熱，而使容器炸裂。

  2. 蘇丹Ⅲ反應(yīng)

  蘇丹Ⅲ可將細(xì)胞中脂肪、栓質(zhì)、角質(zhì)染為桔紅色，因此可用此染料顯示出上述物質(zhì)在細(xì)胞中的分布和位置。

  配制方法：將蘇丹Ⅲ (或蘇丹Ⅳ)染料0.1 克，溶于10 毫升95% 酒精中，然后加入10 毫升甘油。

  3. 間苯三酚反應(yīng)法

  間苯三酚反應(yīng)是植物顯微化學(xué)中確定木質(zhì)化細(xì)胞壁的zui常用和zui簡單的方法。這一反應(yīng)的原理是當(dāng)間苯三酚在酸性環(huán)境下與細(xì)胞壁中的木質(zhì)素相遇時(shí)，發(fā)生櫻桃紅色或紫紅色反應(yīng)。其方法是將要鑒定的切片先用一滴1mol/L 鹽酸浸透(間苯三酚要在酸性環(huán)境下才能與木質(zhì)素起作用)，然后滴一滴5-10% 間苯三酚的85% 酒精溶液，木質(zhì)化的細(xì)胞壁即發(fā)生顏色反應(yīng)。

  4.碘液測試淀粉法

  淀粉遇碘呈藍(lán)色反應(yīng)，它是鑒定淀粉的zui常用方法。

  碘液配制方法：將2 克碘化鉀放入5 毫升蒸餾水中，加熱使其*溶解;然后加入1克碘，*溶解后用蒸餾水稀釋至300 毫升，放入具有毛玻璃塞的棕色玻璃瓶中，置于暗處保存。

  測定淀粉時(shí)，可將上述溶液稀釋2-10 倍，使染色不致過深，。

  5. 壓片法常用的染料

  (1) 醋酸洋紅 為壓片法中zui常用的染料。

  配制方法是：先將100 毫升45% 醋酸水溶液放于燒瓶中煮沸，移去火焰，停止加熱。然后緩慢加入1 克洋紅粉末，全部加入后再煮沸1-2 分鐘。此時(shí)可將一枚生銹鐵釘用棉線懸入溶液中約1 分鐘后取出(鐵為媒染劑)。靜置12 小時(shí)后經(jīng)過過濾，放入磨口玻璃塞棕色瓶中保存?zhèn)溆谩?

  (2) 石炭酸---品紅 為近年創(chuàng)用的一種優(yōu)良核染色劑，將細(xì)胞核和染色體染為紅紫色，細(xì)胞質(zhì)一般不著色，背景清晰。

  其配制方法有二：

  配方Ⅰ：

  原液A：取3 克堿性品紅溶于100 毫升的70%酒精中(此液體可長期保存)。

  原液B：取10 毫升原液A，加入90 毫升5% 的石炭酸(酚)水溶液中(可保存兩周)。

  染色液：取55 毫升原液B 加6 毫升冰醋酸和6 毫升37% 甲醛。

  此染色液因含有較多的甲醛，可使原生質(zhì)體硬化，而能保持其固有的形態(tài)。但也因此不易使組織軟化，因而不太適用于植物組織的染色體壓片染色(本染色液適于植物原生質(zhì)體培養(yǎng)中使用)。在此基礎(chǔ)上加以改進(jìn)的配方Ⅱ，則可普遍地用于一般植物組織的染色體壓片的染色。

  配方Ⅱ：

  取配方Ⅰ中的染色液20 毫或加80 毫升45% 醋酸和1.8 克山梨醇。

  染色液配制后為淡品紅色，如立即使用染色較淺。放置2 周后，染色能力顯著增強(qiáng)，而且放置時(shí)間越久，染色效果越好。

  6.鉻酸-硝酸離析法

  為了觀察一個(gè)細(xì)胞完整的立體形態(tài)結(jié)構(gòu)，可以用一些化學(xué)藥品把細(xì)壁中的中層物質(zhì)(果膠質(zhì))溶解，使細(xì)胞分離散開，便于觀察。

  離析前先把材料洗凈，用刀切成1-2 毫米寬的狹條(如葉片)或切成火柴棍粗細(xì)的長約1 厘米的小條(如根或莖)。然后把切好的材料放進(jìn)小玻璃瓶中，加入離析液(加入量約為材料的20 倍)，塞緊瓶塞，放于30-40℃ 溫箱中。浸漬時(shí)間因材料性質(zhì)而異，葉片和幼嫩的根莖組織3-4 小時(shí)即可，而有些次生結(jié)構(gòu)(如木質(zhì)部)則需要長的時(shí)間。離析情況應(yīng)隨時(shí)檢查，檢查的方法是取少許離析材料，放在載玻片上，加一滴水，蓋上蓋玻片，然后用解剖針輕輕敲打，如果材料分離則表明浸漬時(shí)間已夠。浸漬時(shí)間超過一天以上時(shí)，應(yīng)換離

  析液一次。離析時(shí)間已夠的材料，用水洗凈后放入70% 酒精中保存。

  離析液配方：

  10% 鉻酸 1份

  10%硝酸 1 份

  兩種溶液應(yīng)在使用時(shí)才混合，混合均勻后再使用。

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