大鼠弓形蟲IgG抗體 Elisa試劑盒說明書

  本產(chǎn)品僅供研究使用

  【試劑盒名稱】

  大鼠弓形蟲IgG抗體定量檢測(cè)試劑盒(ELISA)

  【試劑盒用途】

  定量檢測(cè)大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中弓形蟲IgG抗體的含量。

  【檢測(cè)原理】

  本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)。將標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣本加入到預(yù)先包被大鼠弓形蟲IgG抗原透明酶標(biāo)包被板中，溫育足夠時(shí)間后，洗滌除去未結(jié)合的成分，再加入酶標(biāo)工作液，溫育足夠時(shí)間后，洗滌除去未結(jié)合的成分。依次加入底物A、B，底物(TMB)在辣根過氧化物酶(HRP)催化下轉(zhuǎn)化為藍(lán)色產(chǎn)物，在酸的作用下變成，顏色的深淺與樣品中大鼠弓形蟲IgG抗體濃度呈正相關(guān)，450nm波長下測(cè)定OD值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的OD值，計(jì)算樣本中大鼠弓形蟲IgG抗體含量。

  【試劑盒組成】

  1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 ; 2 酶標(biāo)試劑 6ml×1 瓶

  3 酶標(biāo)包被板 12 孔×8 條 ; 4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶

  5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 ; 6 顯色劑B 液 6ml×1/瓶

  7 終止液 6ml×1 瓶; 8 標(biāo)準(zhǔn)品(48ng/ml) 0.5ml×1 瓶

  9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1 瓶; 10 說明書 1 份

  11 封板膜 2 張; 12 密封袋 1 個(gè)

  【操作步驟】

  1、準(zhǔn)備：從冰箱取出試劑盒，室溫復(fù)溫平衡30分鐘。

  2、配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。

  3、加標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣本：取足夠數(shù)量的酶標(biāo)包被板，固定于框架上，分別設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣本孔和空白對(duì)照孔，記錄各孔位置，在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μL;待測(cè)樣本孔中先加入待測(cè)樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL(即樣本稀釋5倍);空白對(duì)照孔不加。

  4、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。

  5、洗板：棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板4次(也可用洗板機(jī)按說明書操作洗板)。

  6、加酶標(biāo)工作液：每孔加入酶標(biāo)工作液50μL，空白對(duì)照孔不加。

  7、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。

  8、洗板：棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板4次(也可用洗板機(jī)按說明書操作洗板)。

  9、顯色：每孔先加入顯色劑A 液50μL，再加入顯色劑B液 50μL，平板混勻器混勻30s(或用手輕輕震蕩混勻30s)，37℃避光顯色15min。

  10、終止：取出酶標(biāo)板，每孔加終止液50μL，終止反應(yīng)(顏色由藍(lán)色立轉(zhuǎn))。

  11、測(cè)定：以空白孔調(diào)零，在終止后15分鐘內(nèi)，用450nm波長測(cè)量各孔的吸光值(OD值)。

  12、計(jì)算：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對(duì)應(yīng)的OD值，計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣本的OD值，在回歸方程上計(jì)算出對(duì)應(yīng)的樣品濃度，也可以使用各種應(yīng)用軟件來計(jì)算。zui終濃度為實(shí)際測(cè)定濃度乘以稀釋倍數(shù)。

  【樣本要求】

  1、樣本不能含疊氮鈉(NaN3)，因?yàn)榀B氮鈉(NaN3)是辣根過氧化物酶(HRP)的抑制劑。

  2、標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能立即試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

  3、樣本應(yīng)充分離心，不得有溶血及顆粒。

  【注意事項(xiàng)】

  1、實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。

  2、酶標(biāo)包被板開封后如未用完，應(yīng)立即裝入密封袋中加干燥劑保存。

  3、建議所有的標(biāo)準(zhǔn)品、樣本和空白對(duì)照都做雙份檢測(cè)，取平均值，以減小實(shí)驗(yàn)誤差。

  4、牢記樣本已經(jīng)稀釋5倍，計(jì)算結(jié)果乘以5才是樣本實(shí)際濃度。

  5、本試劑盒定量范圍為0.5-16U/L，超過此范圍，為標(biāo)準(zhǔn)曲線延伸計(jì)算所得，不做為準(zhǔn)確定量結(jié)果，請(qǐng)用特殊稀釋液稀釋后測(cè)定準(zhǔn)確結(jié)果(0.5-16U/L范圍內(nèi))，乘以總稀釋倍數(shù)即為樣本zui終濃度。

  6、若顯色過淺，可適當(dāng)延長底物溫育時(shí)間。

  7、為避免交叉污染，標(biāo)準(zhǔn)品、樣本和空白對(duì)照每加一個(gè)就要換一次吸頭;酶標(biāo)工作液、樣本稀釋液和底物等公共組分，要懸臂加樣，不得碰到微孔;不得重復(fù)使用封板膜。

  8、試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用，不同批號(hào)的試劑不得混用。

  9、底物B對(duì)光敏感，避免長時(shí)間暴露于光下。

  【操作程序總結(jié)】

  準(zhǔn)備試劑，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品

  加入準(zhǔn)備好的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品，37℃反應(yīng)30分鐘

  洗板4次，加入酶標(biāo)試劑，37℃反應(yīng)30分鐘

  洗板4次，加入顯色液A、B，37℃顯色15分鐘

  加入終止液

  15分鐘之內(nèi)讀OD值

  計(jì)算

  【檢測(cè)范圍】

  0.5U/L - 16U/L

  【規(guī)格】

  96人份/盒

  【貯藏】

  2-8℃，避光防潮保存。

  【有效期】

  6個(gè)月

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