胰蛋白酶在細(xì)胞培養(yǎng)中發(fā)揮的作用及操作步驟

  胰蛋白酶是細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中常見(jiàn)的一種試劑，他在細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中怎樣才能發(fā)揮該有的作用呢?又該如何進(jìn)行實(shí)驗(yàn)?zāi)?讓我們跟隨古朵生物一起來(lái)看看!

  作用：

  1.胰蛋白酶是一種消化酶，可分解許多脊椎動(dòng)物消化系統(tǒng)中的蛋白質(zhì)，它存在于胰液中。

  2.質(zhì)膜上的蛋白質(zhì)負(fù)責(zé)多種功能，這些功能對(duì)于維持細(xì)胞的正常生理活動(dòng)至關(guān)重要。

  3.一些質(zhì)膜蛋白(如鈣粘蛋白家族)是粘附蛋白，可作為錨，將細(xì)胞骨架蛋白連接到細(xì)胞外基質(zhì)。這有助于細(xì)胞粘附和細(xì)胞遷移。

  4.在細(xì)胞培養(yǎng)物中，可以將胰蛋白酶添加到培養(yǎng)基中，通過(guò)消化粘附蛋白從培養(yǎng)皿表面釋放貼壁細(xì)胞。

  5.胰蛋白酶還通過(guò)消化粘附蛋白從聚集體中釋放細(xì)胞。

  6.EDTA也與胰蛋白酶一起添加到細(xì)胞培養(yǎng)物中，以螯合培養(yǎng)基中的二價(jià)離子。鈣和鎂離子可能抑制胰蛋白酶的作用。

  7.終，胰蛋白酶有助于從細(xì)胞培養(yǎng)物中獲得單個(gè)細(xì)胞，促進(jìn)細(xì)胞的下游處理。

  操作步驟：

  1.吸取培養(yǎng)基，用無(wú)菌的PBS、Hanks液或無(wú)血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次，以除去殘余的血清。

  2.加入適量的胰蛋白酶消化液，略蓋過(guò)細(xì)胞即可。根據(jù)細(xì)胞的特性可以增加或減少胰酶用量，室溫放置30秒至2分鐘。

  3.顯微鏡下觀察，細(xì)胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化呈白茫狀;或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來(lái)。

  4.此時(shí)吸除胰酶細(xì)胞消化液。加入含血清的完全細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下細(xì)胞，即可直接用于 后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入胰酶細(xì)胞消化液重新消化。

  注意事項(xiàng)：

  1.-20℃保存，冰袋運(yùn)輸，至少1年有效。

  2.應(yīng)根據(jù)不同組織和細(xì)胞的性質(zhì)確定佳消化時(shí)間和胰蛋白酶的用量，消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，以免影響細(xì)胞的活力。

  3.解凍后宜分裝使用，避免反復(fù)凍融。

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