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古朵闡述:人真皮成纖維細(xì)胞的分離培養(yǎng)制備方式

發(fā)布時(shí)間:2023-11-13瀏覽次數(shù):748返回列表

  人真皮成纖維細(xì)胞的分離培養(yǎng)制備方式

  真皮成纖維細(xì)胞屬于由中胚層分化而來的間質(zhì)細(xì)胞。細(xì)胞來源于人正常的皮膚組織,真皮成纖維細(xì)胞是一種貼壁培養(yǎng)方式的細(xì)胞,由于這些細(xì)胞非常容易培養(yǎng),它們已經(jīng)被廣泛用于細(xì)胞和分子生物學(xué)研究中。

  一般而言,成纖維細(xì)胞能夠分泌I型和III型膠原等細(xì)胞外基質(zhì),并且研究表明不同器官中的成纖維細(xì)胞有顯著的不同。傷口修復(fù)時(shí),真皮成纖維細(xì)胞由可增殖,可遷移的表型變?yōu)橛惺湛s性的,可重塑基質(zhì)的表型,同時(shí),它們會分泌大量的透明質(zhì)酸來應(yīng)對修復(fù)時(shí)的炎癥反應(yīng)。

  以下是提供的一種人真皮成纖維細(xì)胞的制備方式(僅供參考):

  1.首先在分離真皮成纖維細(xì)胞時(shí)要做到在無菌條件下進(jìn)行,打開生物安全柜紫外燈30min作無菌處理。

  2.將手術(shù)廢棄的皮膚組織浸泡75%酒精,消毒2min,

  3.將皮膚組織置含P/S的PBS中清洗至少3遍,

  4.然后用眼科剪除去脂肪及結(jié)締組織等,

  5.將皮膚剪成0.5*0.5 cm小塊,放入dish中,加0.1%的dispase溶液,封口膜封口,4℃冰箱過夜消化,

  6.第二天,用鑷子將表皮與真皮分開(薄的那層是表皮,厚的那層是真皮),

  7.將真皮剪碎,移至離心管,用0.1%膠原Ⅰ型酶+0.1%膠原Ⅱ型酶+0.1%膠原Ⅳ型酶+ 37℃水浴鍋中消化至少2 h(視消化程度而定),

  8.用100 μm網(wǎng)篩過濾,

  9.取濾液,300 g,離心5 min,

  10.用完全培養(yǎng)基重懸沉淀,

  11.鋪瓶,

  12.隔天換液。

  以上是皮膚成纖維細(xì)胞分離培養(yǎng)的一種方式,不同的技術(shù)人員分離培養(yǎng)的方法也不同,使用的試劑比例也不盡相同,皮膚成纖維細(xì)胞特異性纖維連接蛋白或波形蛋白表達(dá)檢測,采用細(xì)胞免疫熒光技術(shù)。細(xì)胞純度可高達(dá)于90%,所有的細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,并請注意防護(hù),所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

  上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品,勵(lì)志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司,產(chǎn)品遠(yuǎn)銷多個(gè)國家和地區(qū),我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準(zhǔn)則、以市場需求為導(dǎo)向,不斷開發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品,提供客戶滿意的綜合服務(wù)質(zhì)量"的方針。古朵試劑盒