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反相色譜柱ODS柱使用注意事項(xiàng)

發(fā)布時(shí)間:2017-07-20瀏覽次數(shù):3332返回列表

ODS柱是一種常用的反相色譜柱,也叫C18柱;由于它是長鏈烷基鍵合相,有較高的碳含量和更好的疏水性,對各種類型的生物大分子有更強(qiáng)的適應(yīng)能力,因此在生物化學(xué)分析工作中應(yīng)用的為廣泛。反相色譜柱ODS柱使用注意事項(xiàng)如下:
1、使用預(yù)柱保護(hù)分析柱(硅膠在性流動(dòng)相/離子性流動(dòng)相中有一定的溶解度);
2、將樣品溶解在流動(dòng)相或性相近的溶劑中。如果使用梯度洗脫,則需要將樣品溶解在初始流動(dòng)相或性相近的溶劑中。樣品溶液不應(yīng)含有任何顆粒物,使用0.5μm或更小粒徑的濾膜過濾。樣品溶液如果使用強(qiáng)溶劑(例如,流動(dòng)相為水,樣品溶劑為甲醇),為達(dá)到較好峰形,需要降低進(jìn)樣量(以250x4.6mm規(guī)格為例,小于10μL);
3、在進(jìn)行分析之前,請使用至少20倍柱體積的流動(dòng)相沖洗色譜柱,以使色譜柱達(dá)到平衡;
4、所有硅膠基質(zhì)色譜柱使用溫度應(yīng)低于60℃;
5、流動(dòng)相使用前必須經(jīng)脫氣和過濾處理;
6、反相色譜柱ODS柱,保存溶劑通常是含至少30% 有機(jī)相的水溶液,也可在常規(guī)清洗后直接保存在有機(jī)相中;
如果需要長時(shí)間儲藏,則需要使用較高比例的有機(jī)相(有機(jī)相比例至少大于50%);
7、大多數(shù)反相色譜柱的pH穩(wěn)定范圍是2-7.5,盡量不超過該色譜柱的pH范圍;
8、避免流動(dòng)相組成及性的劇烈變化;
9、所有流動(dòng)相,特別是含有緩沖鹽的流動(dòng)相,當(dāng)日實(shí)驗(yàn)當(dāng)日配制;如果使用了前日配制的流動(dòng)相,請確保流動(dòng)相pH值沒有變化,并確保流動(dòng)相沒有長菌。 流動(dòng)相的pH值取決于您的應(yīng)用和色譜柱填料類型。我們建議在所有的色譜柱盡量在pH2~8范圍內(nèi)使用。請盡量避免在常規(guī)流動(dòng)相中使用很高比例的水(>95%)作為流動(dòng)相,可能會造成保留時(shí)間的不穩(wěn)定或者色譜柱鍵合相的損害;
10、如果使用性或離子性的緩沖溶液作流動(dòng)相,應(yīng)在實(shí)驗(yàn)完畢柱子沖洗干凈,并保存于甲醇或乙腈中;
11、氯化物的溶劑對其有一定的腐蝕性,故使用時(shí)要注意,柱及連接管內(nèi)不能長時(shí)間存留此類溶劑,以避免腐蝕。
12、在條件允許情況下,使用前按照說明書方法進(jìn)行柱效測試。以確保色譜柱的正常。
13、在儲存反相色譜柱ODS柱之前,請使用至少20倍柱體積的不帶緩沖鹽的流動(dòng)相沖洗色譜柱(去除緩沖鹽),再用更強(qiáng)的溶劑沖洗色譜柱(去除強(qiáng)保留成分,反相色譜通常使用甲醇或乙腈),然后使用合適的溶劑儲存色譜柱。