有機(jī)磷農(nóng)藥酶聯(lián)免疫試劑盒

有機(jī)磷農(nóng)藥酶聯(lián)免疫試劑盒

1 使用目的：

有機(jī)磷農(nóng)藥酶聯(lián)免疫試劑盒用于飼料、魚、蝦和肉類組織（如雞、牛肉和豬肉），雞蛋、蜂蜜、牛奶、血清和尿樣中有機(jī)磷農(nóng)藥（Organophosphorus Pestcides）殘留的定量檢測。

2 實(shí)驗(yàn)原理

有機(jī)磷農(nóng)藥酶聯(lián)免疫試劑盒采用競爭ELISA方法，在微孔板包被有有機(jī)磷農(nóng)藥（Organophosphorus Pestcides）偶聯(lián)抗原，加入有機(jī)磷農(nóng)藥（Organophosphorus Pestcides）標(biāo)準(zhǔn)品或樣品，游離有機(jī)磷農(nóng)藥（Organophosphorus Pestcides）與微孔條上預(yù)包被的有機(jī)磷農(nóng)藥（Organophosphorus Pestcides）偶聯(lián)抗原互相競爭抗有機(jī)磷農(nóng)藥（Organophosphorus Pestcides）抗體酶標(biāo)記物，用TMB底物顯色，加入終止液后顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色，用酶標(biāo)儀在450nm波長下進(jìn)行檢測，吸光值與樣品中有機(jī)磷農(nóng)藥（Organophosphorus Pestcides）含量成反比，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中有機(jī)磷農(nóng)藥（Organophosphorus Pestcides）的含量。 

3 組成

3.1 預(yù)包被的有機(jī)磷農(nóng)藥（Organophosphorus Pestcides）偶聯(lián)抗原的可拆酶標(biāo)板：1塊（12孔×8條）。 3.2有機(jī)磷農(nóng)藥（Organophosphorus Pestcides）標(biāo)準(zhǔn)品：6瓶（1ml/瓶），含量分別是：0ug/ml, 0.4 ug/ml,1.2 ug/ml,3.6 ug/ml,10.8 ug/ml,32.4ug/ml

3.3抗環(huán)丙沙星（CIP）抗體酶結(jié)合物：1瓶（6ml）。 3.4顯色液A：1瓶（6ml）。 3.5顯色液B：1瓶（6ml）。 3.6終止液：1瓶（6ml），2M硫酸。 3.7樣本稀釋液：1瓶（10×,  6ml），用于樣品稀釋用。 3.8濃縮洗滌液：1瓶（20×，20ml），用于洗板。 3.9說明書一份。

4 需要而未提供的材料 4.1 設(shè)備 4.1.1波長450nm酶標(biāo)儀。  4.1.2粉碎機(jī)。 4.1.3量筒。 4.1.4振蕩器。 4.1.5漏斗。 4.1.6Whatman No 1或相當(dāng)?shù)臑V紙。 4.1.7微量移液器。 4.2 試劑 4.2.1去離子水或蒸餾水。 4.2.2 甲醇。 5 貯存 5.1 有機(jī)磷農(nóng)藥酶聯(lián)免疫試劑盒貯存于2~8℃，切勿冷凍 5.2 未用完的微孔板應(yīng)該密封干燥保存 6 注意事項 6.1 使用試劑盒前請仔細(xì)閱讀說明書。 6.2 不要使用過期試劑盒。 6.3 試劑盒使用前，將試劑恢復(fù)至室溫（25±2℃），建議至少回溫2小時。 6.4 標(biāo)準(zhǔn)品中含有有機(jī)磷農(nóng)藥（Organophosphorus Pestcides），使用時應(yīng)特別注意，操作時應(yīng)帶手套。 6.5 終止液中含有硫酸，使用時防止灼傷皮膚及腐蝕衣物。 6.6 不同標(biāo)準(zhǔn)品、樣品所用吸頭不能混用，否則會影響試驗(yàn)結(jié)果。 6.7 不同批號試劑盒中的試劑不得混用；不同標(biāo)準(zhǔn)品、樣品所用吸頭不得混用，否則會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 6.8 稀釋樣本時必須用本試劑盒中的樣本稀釋液，否則會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果 6.9 混合試劑時應(yīng)避免起泡。 7 工作液準(zhǔn)備 7.1有機(jī)磷農(nóng)藥（Organophosphorus Pestcides）標(biāo)準(zhǔn)品溶液：0ug/ml, 0.4 ug/ml,1.2 ug/ml,3.6 ug/ml,10.8 ug/ml,32.4ug/ml

7.2 濃縮洗滌液：用蒸餾水按1:20(1+19)稀釋備用

7.3 樣本稀釋液：備用 7.3 顯色劑：已備用，避免光線直照 7.4 反應(yīng)終止液：已備用 8 樣品處理程序（樣品在提取過程中，要嚴(yán)格按說明書操作，提取過程中應(yīng)準(zhǔn)確稀釋，否則會出現(xiàn)結(jié)果不準(zhǔn)確，樣品應(yīng)當(dāng)保存在陰涼避光之處及冷藏保存） 8.1取10g粉碎的樣品，加 20ml 70%甲醇溶液 8.2強(qiáng)力振蕩3分鐘 8.3用Whatman No 1濾紙過濾 8.4取100µl處理后的樣品，加入400µl樣本稀釋液 8.5取50μl稀釋液進(jìn)行分析（稀釋倍數(shù)10） 9 酶免分析步驟 9.1 實(shí)驗(yàn)須知 9.1.1 實(shí)驗(yàn)開始前請將所有試劑于盒外充分恢復(fù)至室溫（25±2℃），時間約2小時?；販刂潦覝兀?5±2℃）后再取出微孔條，多余的微孔條重新密封立即于2~8℃干燥保存 注：一定保證回溫充分，否則影響檢測的精確度和準(zhǔn)確度。 9.1.2 使用后請立即將試劑放回2~8℃保存 9.1.3 請不要改變分析程序 9.1.4 請使用精確的微量移液器 9.1.5 操作一旦開始，請不要中斷任何程序 9.1.6 ELISA結(jié)果的可重復(fù)性極大程度的取決于操作程序，請嚴(yán)格按照要求操作 9.1.7 為避免交叉污染，每個標(biāo)準(zhǔn)品和樣品均應(yīng)使用不同的吸頭加樣 9.1.8 加樣時請勿讓吸頭接觸微孔中的溶液或內(nèi)表面 9.2 分析步驟 9.2.1 預(yù)先進(jìn)行編號，標(biāo)記B0、標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的位置，推薦進(jìn)行雙孔檢測 9.2.2 取所需數(shù)量的微孔（微孔條可拆），將多余板條重新密封并立即放回2~8℃保存 9.2.3 樣品稀釋液（10×）、濃縮洗滌液（20×）稀釋成工作液(蒸餾水或去離子水稀釋) 9.2.4 在B0孔中加入50µl0.0 ng/ml標(biāo)準(zhǔn)品溶液 9.2.5 在各標(biāo)準(zhǔn)孔中加入50μl的標(biāo)準(zhǔn)品溶液 9.2.6 在各樣品孔中加入50µl樣品溶液 9.2.7 在所有孔中加入50µl的抗有機(jī)磷農(nóng)藥（Organophosphorus Pestcides）抗體酶結(jié)合物 9.2.8 輕輕晃動反應(yīng)板幾秒鐘。  9.3 37℃溫浴30min （溫浴過程中不時輕拍反應(yīng)板，可以減少雙孔誤差） 9.3.1 甩掉孔中液體，用洗液洗滌微孔板5次，后一次應(yīng)在吸水紙上拍打以完全除去孔中液體。 9.4 反應(yīng) 9.4.1 洗滌程序完成后，立即用微量移液器在每個微孔中先加入50µl顯色液A，再加 50µl顯色液B；輕微晃動反應(yīng)板使之徹底混勻 9.4.2 37℃溫浴10min 9.4.3 每孔中加入50µl終止液，混勻 9.4.4 在450nm下檢測吸光度，結(jié)果在5min內(nèi)讀取。 10 結(jié)果計算 10.1定量分析 10.1.1所獲得的每個濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣本吸光度值的平均值（B）除以一個標(biāo)準(zhǔn)（0標(biāo)準(zhǔn)）的吸光度值（B0）再乘以100%，即百分吸光度值。 B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值 B0—0 ug/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值 10.1.2以有機(jī)磷農(nóng)藥（Organophosphorus Pestcides）濃度的對數(shù)值為X軸，百分吸光度值為Y軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。根據(jù)樣品百分吸光度值，可從曲線上得到對應(yīng)點(diǎn)的橫坐標(biāo)，即為有機(jī)磷農(nóng)藥（Organophosphorus Pestcides）濃度的對數(shù)值，求得反對數(shù)即為測定液中有機(jī)磷農(nóng)藥（Organophosphorus Pestcides）濃度C（ug/ml） 10.1.3由于樣品經(jīng)過了預(yù)先稀釋，因此根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線所得出的樣品濃度一定要再乘以其稀釋倍數(shù)。  10.2 半定量測定 10.1.1目測半定量測定：首先選擇一個適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)液與樣品同運(yùn)行，根據(jù)樣品與標(biāo)準(zhǔn)品吸光度值的高低比較，判斷樣品濃度值是小于還是大于標(biāo)準(zhǔn)值。 10.1.2儀器半定量測定：首先選擇一個適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)液與樣品同運(yùn)行，根據(jù)樣品與標(biāo)準(zhǔn)品顏色深淺比較，判斷樣品濃度值是小于還是大于標(biāo)準(zhǔn)值。

11 特異性 物質(zhì) 交叉反應(yīng) 有機(jī)磷農(nóng)藥（Organophosphorus Pestcides）100%

12 有機(jī)磷農(nóng)藥酶聯(lián)免疫試劑盒參數(shù)檢測下限為0.4 ug/ml B0吸光度值應(yīng)大于1.0 試劑盒吸光度板內(nèi)誤差小于8％，板間誤差小于15％。 用本說明書提供的組織樣本提取方法回收率大于80％。 13 標(biāo)準(zhǔn)曲線模式（僅供參考） 試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍為0.4ug/ml ~32.4ug/ml。

14 分析限制 有機(jī)磷農(nóng)藥酶聯(lián)免疫試劑盒檢測為陽性的樣品應(yīng)該用另一種方法如HPLC或GC/MS加以確證