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公司名稱:赫澎(上海)生物科技有限公司

聯(lián)系人:張碩

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地址:上海金山區(qū)漕涇鎮(zhèn)亭衛(wèi)公路3688號

 
新聞中心

人巨噬細胞移動抑制因子(MIF)ELISA試劑盒赫澎生物新品發(fā)布,一步酶免法

發(fā)布時間:2017-07-24瀏覽次數(shù):1207返回列表

赫澎(上海)生物有限公司
He Peng (Shanghai)Biotechnology Co.,Ltd.
銷售部:
張碩:
QQ:1438227360
王霞:
QQ:3418426269
微信號:
固話 :
傳真 :
郵箱 :hepeng20160718@foxmail.com
網(wǎng)址 :www.hepengbio.com
使用說明書
檢測原理:
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預(yù)先包被鈣調(diào)素(CAM)抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的鈣調(diào)素(CAM)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。
樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并樣品均勻地充分解凍。
自備物品:
酶標儀(450nm)
加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
37℃恒溫箱
操作注意事項:
試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶,這屬于正?,F(xiàn)象,水浴加熱使結(jié)晶完溶解后再使用。實驗中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。濃度為0的S0號標準品即可視為陰性對照或者;按照說明書操作時樣本已經(jīng)稀釋5倍,終結(jié)果乘以5才是樣本實際濃度。嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。液體組分使用前充分搖勻。
試劑盒組成:

注:標準品(S0-S5)濃度依次為:0、3、6、12、24、48μg/mL
試劑的準備:
20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。
洗板方法:
手工洗板:甩盡孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5次。
自動洗板機:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。
操作步驟:
從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。設(shè)置標準品孔和樣本孔,標準品孔加不同濃度的標準品50μL;樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;孔不加。 除孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。每孔加入底物A、B50μL,37℃避光孵育15min。每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定孔的OD值。
結(jié)果判斷:
繪制標準曲線:在Excel工作表中,以標準品濃度作橫坐標,對應(yīng)OD值作縱坐標,繪制出標準品線性回歸曲線,按曲線方程計算樣本濃度值。
試劑盒性能:
性:標準品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值,大于等于0.9900。
靈敏度:檢測濃度小于1.0μg/mL。
特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
重復性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。
貯藏:2-8℃,避光潮保存。
有效期:6個月
免責聲明:
試劑盒僅供研究使用,不得用于臨床實驗或人體實驗,否則所產(chǎn)生的后果,由實驗者承擔,本公司概不負責。
嚴格按照說明書操作,實驗者違反說明書操作,后果由實驗者承擔。

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