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基因多態(tài)性對(duì)原發(fā)性肝癌細(xì)胞浸潤(rùn)的實(shí)驗(yàn)方法

發(fā)布時(shí)間:2018-07-24瀏覽次數(shù):1439返回列表

肝癌細(xì)胞

1.1 研究對(duì)象

前瞻性收集 2017 年 1 月 -2017 年 12 月吉林大學(xué)一醫(yī)院收治的原發(fā)性肝癌患者臨床資料。納入標(biāo)準(zhǔn) : 原發(fā)性肝癌(確診依據(jù)為病理診斷) ; 有手術(shù)適應(yīng)證,可行手術(shù)治療 ; 年齡 18 ~ 75 歲 ; 同意參與本研究,并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn) : 合并其他惡性腫瘤 ; 復(fù)發(fā)性肝癌 ; 肝、腎、心、腦、肺等重要臟器功能不全; 感染性疾??; 血液系統(tǒng)疾?。?凝血功能障礙;術(shù)前接受新輔助化療等特殊治療 ; 3 個(gè)月內(nèi)曾使用免疫調(diào)節(jié)劑; 免疫功能不全 ; 遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,不宜行手術(shù)治療的晚期肝癌患者。研究期間共納入原發(fā)性肝癌患者109 例,根據(jù)CD44 基因 rs4756195 位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性,將患者分為 AA 組、AG 組和 GG 組,分別為 67、23 和 19 例。
1.2 觀察指標(biāo)
主要觀察指標(biāo)為腫瘤組織中 CD4+ T 細(xì)胞、CD8 +T 細(xì)胞、Treg 細(xì)胞、Th17 細(xì)胞。次要觀察指標(biāo)為白介素 -2 (interleukin-2, IL-2) 、 白介素 -10 (interleukin-10,IL-10) 、腫瘤生長(zhǎng)因子 -β(tumor growth factor-β,TGF-β)和白介素 -17(interleukin-17, IL-17) 。
1.3 方法
1.3.1流式細(xì)胞術(shù)
術(shù)中留取原發(fā)性肝癌組織標(biāo)本(距離肝癌邊緣 >1 cm 的肝癌組織) ,使用流式細(xì)胞儀(美國 Beckman coulter 公司 Epics XL 型) 檢測(cè) CD4+ T、CD8+ T、Treg 及 Th17 細(xì)胞。
1.3.2免疫組織化學(xué)法
采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)IL-2、IL-10、TGF-β 和 IL-17,相關(guān)單克隆抗體均購自美國 Santa Cruz 公司,抗體比例 1 ∶ 80。陽性判定標(biāo)準(zhǔn) :根據(jù)染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞百分比計(jì)算,其中不著色、淺黃色、棕黃色、黃褐色分別為0、1、2 和 3 分, 陽性細(xì)胞數(shù)為 <10%、10% ~ <40%、40% ~ <70%、≥ 70% 分別計(jì) 0、1、2 和 3 分,兩者之和為總分, 總分≥ 2 分為陽性, <2 分為陰性。

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