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關(guān)鍵病毒基因沉默抑制子新發(fā)現(xiàn)

發(fā)布時間:2015-01-06瀏覽次數(shù):1159返回列表

       研究所植物基因組學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室郭惠珊研究員,其早年畢業(yè)于中山大學(xué),入選中科院“百人計劃”,2005年曾榮獲杰出青年基金。這項研究獲得了重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計劃(973計劃),自然科學(xué)基金重點(diǎn)項目的資助支持。
在植物和病毒相互作用的長期過程中,兩者之間存在著防御、反防御的復(fù)雜斗爭關(guān)系。寄主的RNA沉默機(jī)制和病毒編碼沉默抑制子就是防御-反防御斗爭的典型。由黃瓜花葉病毒(CMV)編碼的基因沉默抑制子2b蛋白是早在1998年就被發(fā)現(xiàn)的抑制子之一,CMV 2b盡管是一個只有111個氨基酸的小蛋白,卻具有非常復(fù)雜的生化特性和亞細(xì)胞定位特性,包括與RNA沉默途徑效應(yīng)復(fù)合物的關(guān)鍵因子AGO蛋白互作,與短/長的dsRNA結(jié)合,靶向細(xì)胞核和核仁;CMV 2b還具有復(fù)雜的抑制子活性,包括抑制轉(zhuǎn)錄后基因沉默(PTGS)和依賴RNA的DNA甲基化(RdDM),抑制沉默的細(xì)胞間傳遞,抑制AGO蛋白的剪切活性,抑制寄主的RDR6-依賴的抗病毒途徑等。
但是關(guān)于2b的這111個氨基酸究竟是如何決定的2b的這些生化特性,又是如何影響2b復(fù)雜的抑制子活性,其機(jī)制目前還研究得很不透徹。
在這篇文章中,研究人員通過分段克隆構(gòu)建了CMV 2b蛋白的11個突變體,詳細(xì)分析了2b各種突變體的亞細(xì)胞定位、RNA結(jié)合特性、與AGO間的互作、對PTGS和RdDM途徑的抑制作用等。研究發(fā)現(xiàn),2b的dsRNA的結(jié)合活性以及2b的核定位所需要的結(jié)構(gòu)域與2b與AGO蛋白的互作所需要的結(jié)構(gòu)域是分開的。他們鑒定出2b的核仁定位信號(NoLS)位于2b結(jié)合dsRNA的結(jié)構(gòu)域(dsRBD)之間;2b和AGO蛋白的體外互作不需要dsRBD。
有趣的是,SD2b與AGO蛋白在體內(nèi)的互作需要這個有功能的NoLS,并且2b和AGO的體內(nèi)互作改變2b和AGO的細(xì)胞核定位。通過體內(nèi)抑制子活性檢測發(fā)現(xiàn),2b蛋白通過捕獲siRNAs、長的dsRNAs前體dsRNA,而不是通過作用于AGO蛋白,來實(shí)現(xiàn)其抑制子活性。也就是說,體內(nèi)抑制PTGS和RdDM都不依賴于2b-AGO的相互作用。

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