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公司名稱:上海素爾生物科技有限公司

聯(lián)系人:市場部

電話:15821734033

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BJ hTERT細胞,細胞株培養(yǎng)

發(fā)布時間:2016-05-04瀏覽次數(shù):920返回列表

BJ hTERT細胞,細胞株培養(yǎng)

產(chǎn)品名稱:BJ hTERT細胞,細胞株培養(yǎng)

中文名稱:人胚腎細胞;表達SV40T抗原人胚腎上皮細胞

規(guī)格:25T

形態(tài)特性:圓形

生長特性:懸浮生長

特征特性:該細胞穩(wěn)定表達SV40大T抗原,并且促進適病毒產(chǎn)物的產(chǎn)生。

培養(yǎng)條件:DMEM(HG)+500ug/mlG418+10%FBS

傳代方法:1:2傳代

庫存狀態(tài):素爾現(xiàn)貨

上海素爾生物提供400多種類細胞株細胞系,質(zhì)量穩(wěn)定,價格優(yōu)惠,傳代次數(shù)少,細胞狀態(tài)良好,飽滿,有光澤,提供多項細胞復(fù)蘇服務(wù),原代細胞和耐藥株的建立,細胞染色,STR分型鑒定。囊括歸納:1.細胞培養(yǎng)(代養(yǎng)細胞) 2.整體課題中細胞培養(yǎng) 3.MTT(1-48) 4.MTT(49-72) 5.MTT(73-96) 6.細胞凋亡檢測(普通) 7.細胞凋亡檢測(細胞有綠色熒光) 8.細胞周期檢測 9.質(zhì)粒轉(zhuǎn)染 10.平板克隆形成 11.細胞劃痕 12.transwell 13.transwell侵襲 14.ROS活性氧檢測 15.線粒體膜電位檢測。

BJ hTERT細胞,細胞株培養(yǎng),如需要訂購,請?zhí)峁┵F單位名稱、發(fā)票抬頭、收貨地址、正確郵編號,聯(lián)系方式: QQ: 張昕

具體操作

. 實驗前準備:

1.將水浴鍋預(yù)熱至37℃

2.用75%酒精擦拭紫外線照射30min的超凈工作臺臺面。

3.在超凈工作臺中按次序擺放好消過毒的離心管、吸管、培養(yǎng)瓶等等。

二.取出凍存管:

1.根據(jù)細胞凍存記錄按標(biāo)簽找到所需細胞的編號。

2.從液氮罐中取出細胞盒,取出所需的細胞,同時核對管外的編號。

三.迅速解凍:

1.迅速將凍存管投入到已經(jīng)預(yù)熱的水浴鍋中迅速解凍,并要不斷的搖動,使管中的液體迅速融化。

2.約1-2min后凍存管內(nèi)液體完全溶解,取出用酒精棉球擦拭凍存管的外壁,再拿入超凈臺內(nèi)。

.平衡離心:用架盤天平平衡后,放入離心機中3000r/min 離心3min

.制備細胞懸液:

1.吸棄上清液。

2.向離心管內(nèi)加入10ml培養(yǎng)液,吹打制成細胞懸液。

.細胞計數(shù):細胞濃度以5×105/ml為宜。

.培養(yǎng)細胞將復(fù)合細胞計數(shù)要求的細胞懸液分裝入培養(yǎng)瓶內(nèi),將培養(yǎng)瓶放入37℃和5%CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)2-4小時(或者24-48小時)后換液繼續(xù)培養(yǎng)培養(yǎng),換液的時間由細胞情況而定。

初學(xué)者易犯錯誤:

1水浴鍋未預(yù)熱或者未預(yù)熱到37℃。

2.水浴鍋內(nèi)凍存管太多,導(dǎo)致傳熱不佳,使融化時間延長。

3.離心前忘記平衡,導(dǎo)致離心機損壞和細胞丟失。

4.一次復(fù)蘇細胞過多,忘記更換吸頭和吸管,導(dǎo)致細胞交叉污染。

(另:冷凍細胞解凍程序)

2.1. 依據(jù)細胞株數(shù)據(jù)單之基礎(chǔ)培養(yǎng)基種類、血清種類和其它之成份和比例, 制備培養(yǎng)基。大多數(shù)之細胞均無法立即適應(yīng)不同之基礎(chǔ)培養(yǎng)基或不同之血清種類, 若因?qū)嶒炐枰?必須有所不同時, 務(wù)必以緩慢比例漸次改變培養(yǎng)基組成, 確定細胞適應(yīng)后, 方進行所需之實驗。

2.2. FBS (fetal bovine serum, 胚牛血清), CS (calf serum, 小牛血清)和HS (horse serum, 馬血清),對細胞而言差異大,請務(wù)必依據(jù)細胞株資料單之血清種類培養(yǎng)之。

2.3. 將培養(yǎng)基置于 37 °C水槽中回溫,回溫后噴以70 % 酒精并擦拭之, 移入無菌操作臺內(nèi)。取出冷凍管, 立即放入37 °C 水槽中快速解凍, 水面高度不可接近或高過冷凍管之蓋沿, 否則易發(fā)生污染。輕搖冷凍管使其在1 分鐘內(nèi)全部融化后, 以70 % ethanol 擦拭冷凍管外部, 移入無菌操作臺內(nèi)。

2.4. 依據(jù)細胞種類和濃度,于無菌操作臺內(nèi)取 10 ml培養(yǎng)基加至 T25或 T75 flask中。取出已解凍之細胞懸浮液,緩緩加入T25 或T75 flask 內(nèi)之培養(yǎng)基, 混 合均勻,放入37 °C,5 % CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

2.5. 對大多數(shù)細胞而言,1 % 以下之冷凍保護劑DMSO,不會對細胞之貼附或活化有不良影響,不需立刻由解凍細胞中去除,待第二天確定細胞生長或貼附良好后再去除即可。唯對少數(shù)因?qū)MSO 敏感或會造成細胞分化之細胞,需立即去除DMSO 者, 則可將解凍后之細胞懸浮液放入5 - 10 ml 培養(yǎng)基中,離心300 xg (約1000 rpm),5 分鐘,小心移去上清液,加入適量新鮮培養(yǎng)基,將細胞均勻混合后, 轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶中, 再放入37 °C, 5 % CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。收到T25 flask 細胞時, 處理方式為︰

1. 于寄送過程中,為避免起泡造成細胞脫落死亡,T25 flask 均加滿培養(yǎng)基。請檢查flask 外觀,并于顯微鏡下觀察細胞生長狀況和有無污染現(xiàn)象,若有任何問題, 不要打開蓋子,請立即通知細胞實驗室。

2. 將原封之T25 flask 靜置于37 °C, 5 % CO2 培養(yǎng)箱中,使細胞回溫至37 °C, 并讓運送過程中少數(shù)脫落的細胞可再附著生長。隔天后,于無菌操作箱內(nèi)取出flask內(nèi)之培養(yǎng)基,(取出之培養(yǎng)基可以再使用),僅留約5-10ml 培養(yǎng)基于flask 內(nèi),依 一般培養(yǎng)方式再將細胞置入培養(yǎng)箱中或細胞已長滿盤, 則將細胞做傳代培養(yǎng)。

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