當(dāng)前位置:儀器交易網(wǎng) » 公司 » 上海素爾生物科技有限公司 » 新聞中心

在線溝通:

沒有合適的產(chǎn)品?是否在線詢價?
詢價標(biāo)題
聯(lián)系人
電話
主要內(nèi)容
驗證碼  

公司名稱:上海素爾生物科技有限公司

聯(lián)系人:市場部

電話:15821734033

手機(jī):19050699345

傳真:021-69125237

郵件:2461955342@qq.com

地址:上海市嘉定區(qū)滬宜公路

 
新聞中心

人非小肺癌細(xì)胞

發(fā)布時間:2016-10-15瀏覽次數(shù):1007返回列表

人非小肺癌細(xì)胞

素爾細(xì)胞庫提供遺傳變異細(xì)胞系、正常組織來源細(xì)胞系、腫瘤細(xì)胞系、工程細(xì)胞系、干細(xì)胞系,涉及人類,大鼠、小鼠、鳥類、倉鼠、魚類、貓類、狗、牛、貂、豬、恒河猴、長鼻袋鼠等。

開學(xué)季,買SUER細(xì)胞庫細(xì)胞,更多好禮相送,買的超值,買的舒心 訂購熱線:人非小肺癌細(xì)胞

大規(guī)模培養(yǎng)常用方法

根據(jù)動物細(xì)胞的類型,可采用貼壁培養(yǎng)、懸浮培養(yǎng)和固定化培養(yǎng)等三種培養(yǎng)方法進(jìn)行大規(guī)模培養(yǎng)。

一、動物細(xì)胞生長特性及培養(yǎng)溫度

1、細(xì)胞生長緩慢,易污染,培養(yǎng)需用抗生素

2、細(xì)胞大,無細(xì)胞壁,機(jī)械強度低,環(huán)境適應(yīng)性差

3、需氧少,不耐受強力通風(fēng)與攪拌

4、群體生長效應(yīng),貼壁生長(錨地依賴性)

5、培養(yǎng)過程產(chǎn)品分布細(xì)胞內(nèi)外,成本高

6、原代培養(yǎng)細(xì)胞一般繁殖50代即退化死亡

依據(jù)在體外培養(yǎng)時對生長基質(zhì)依賴性差異,動物細(xì)胞可分為兩類:

貼壁依賴型細(xì)胞:需要附著于帶適量電荷的固體或半固體表面才能生長,大多數(shù)動物細(xì)胞,包括非淋巴組織細(xì)胞和許多異倍體細(xì)胞均屬于這一類。

非貼壁依賴型細(xì)胞:無需附著于固相表面即可生長,包括血液、淋巴組織細(xì)胞、許多腫瘤細(xì)胞及某些轉(zhuǎn)化細(xì)胞。人非小肺癌細(xì)胞

培養(yǎng)細(xì)胞的適溫度相當(dāng)于各種細(xì)胞或組織取材機(jī)體的正常溫度。人和哺乳動物細(xì)胞培養(yǎng)的適溫度為35~37。偏離這一溫度,細(xì)胞正常的代謝和生長將會受到影響,甚至死亡??偟膩碚f,培養(yǎng)細(xì)胞對低溫的耐力比高溫高。溫度不超過39時,細(xì)胞代謝強度與溫度成正比;細(xì)胞培養(yǎng)置于39~40環(huán)境中1h,即受到一定損傷,但仍能恢復(fù);當(dāng)溫度達(dá)43以上時,許多細(xì)胞將死亡。當(dāng)溫度下降到30~20時,細(xì)胞代謝降低,因而與培養(yǎng)基之間物質(zhì)交換減少。先看到的是細(xì)胞形態(tài)學(xué)的改變以及細(xì)胞從基質(zhì)上脫落下來。當(dāng)培養(yǎng)物恢復(fù)到初始的培養(yǎng)溫度時,它們原有的形態(tài)和代謝也隨之恢復(fù)到原有水平。

二、貼壁培養(yǎng)(attachment culture)是指細(xì)胞貼附在一定的固相表面進(jìn)行的培養(yǎng)。

1、生長特性:貼壁依賴型細(xì)胞在培養(yǎng)時要貼附于培養(yǎng)(瓶)器皿壁上,細(xì)胞一經(jīng)貼壁就迅速鋪展,然后開始有絲分裂,并很快進(jìn)入對數(shù)生長期。一般數(shù)天后就鋪滿培養(yǎng)表面,并形成致密的細(xì)胞單層。

2、貼壁培養(yǎng)的優(yōu)點:

容易更換培養(yǎng)液;細(xì)胞緊密黏附于固相表面,可直接傾去舊培養(yǎng)液,清洗后直接加入新培養(yǎng)液。

容易采用灌注培養(yǎng),從而達(dá)到提高細(xì)胞密度的目的;因細(xì)胞固定表面,不需過濾系統(tǒng)。

當(dāng)細(xì)胞貼壁于生長基質(zhì)時,很多細(xì)胞將更有效的表達(dá)一種產(chǎn)品。

同一設(shè)備可采用不同的培養(yǎng)液/細(xì)胞的比例。

適用于所有類型細(xì)胞。

3、貼壁培養(yǎng)的缺點:與懸浮培養(yǎng)法相比

擴(kuò)大培養(yǎng)比較困難,投資大;

占地面積大;

不能有效監(jiān)測細(xì)胞的生長;

4、細(xì)胞貼壁的表面:要求具有凈陽電荷和高度表面活性。對微載體而言還要求具一定電荷密度;若為有機(jī)物表面,必須具有親水性,并帶陽電荷。

5、貼壁培養(yǎng)系統(tǒng):主要有轉(zhuǎn)瓶、中空纖維(后面專題介紹)、玻璃珠、微載體系統(tǒng)(后面介紹)等。

轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)系統(tǒng):培養(yǎng)貼壁依賴型細(xì)胞初采用轉(zhuǎn)瓶系統(tǒng)培養(yǎng)。轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)一般用于小量培養(yǎng)到大規(guī)模培養(yǎng)的過渡階段,或作為生物反應(yīng)器接種細(xì)胞準(zhǔn)備的一條途徑。細(xì)胞接種在旋轉(zhuǎn)的圓筒形培養(yǎng)器-轉(zhuǎn)瓶中,培養(yǎng)過程中轉(zhuǎn)瓶不斷旋轉(zhuǎn),使細(xì)胞交替接觸培養(yǎng)液和空氣,從而提供較好的傳質(zhì)和傳熱條件。

轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)具有結(jié)構(gòu)簡單,投資少,技術(shù)成熟,重復(fù)性好,放大只需簡單的增加轉(zhuǎn)瓶數(shù)量等優(yōu)點。 但也有其缺點:勞動強度大,占地空間大,單位體積提供細(xì)胞生長的表面積小,細(xì)胞生長密度低,培養(yǎng)時監(jiān)測和控制環(huán)境條件受到限制等。 現(xiàn)在使用的轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)系統(tǒng)包括二氧化碳培養(yǎng)箱和轉(zhuǎn)瓶機(jī)兩類。

反應(yīng)器貼壁培養(yǎng) 此種培養(yǎng)方式中,細(xì)胞貼附于固定的表面生長,不因為攪拌而跟隨培養(yǎng)液一起流動,因此比較容易更換培養(yǎng)液,不需要特殊的分離細(xì)胞和培養(yǎng)液的設(shè)備,可以采用灌流培養(yǎng)獲得高細(xì)胞密度,能有效地獲得一種產(chǎn)品;但擴(kuò)大規(guī)模較難,不能直接監(jiān)控細(xì)胞的生長情況,故多用于制備用量較小、價值高的生物藥品。

CelliGenCelliGen PlusTMBioflo3000反應(yīng)器是常用的貼壁培養(yǎng)式生物反應(yīng)器,用于細(xì)胞貼壁培養(yǎng)時可用籃式攪拌系統(tǒng)和圓盤狀載體。此載體是直徑6毫米無紡聚酯纖維圓片,具很高表面積與體積比(1200cm2/g),利于獲得高細(xì)胞密度?;@式攪拌系統(tǒng)和載體培養(yǎng)是目前貼壁細(xì)胞培養(yǎng)使用多方式,用于雜交瘤細(xì)胞、Hela細(xì)胞、293細(xì)胞、CHO細(xì)胞及其它細(xì)胞培養(yǎng)。此種方式培養(yǎng)細(xì)胞,細(xì)胞接種后貼壁快。

三、懸浮培養(yǎng)(suspension culture):是指細(xì)胞在反應(yīng)器中自由懸浮生長的過程。主要用于非貼壁依賴型細(xì)胞培養(yǎng),如雜交瘤細(xì)胞等;是在微生物發(fā)酵的基礎(chǔ)上發(fā)通起來的。

無血清懸浮培養(yǎng)是用已知人源或動物來源的蛋白或激素代替動物血清的一種細(xì)胞培養(yǎng)方式,它能減少后期純化工作,提高產(chǎn)品質(zhì)量,正逐漸成為動物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)的研究新方向。

四、固定化培養(yǎng)(immobilization culture):是將動物細(xì)胞與水不溶性載體結(jié)合起來,再進(jìn)行培養(yǎng)。上述兩大類細(xì)胞都適用,具有細(xì)胞生長密度高,抗剪切力和抗污染能力強等優(yōu)點,細(xì)胞易于產(chǎn)物分開,有利于產(chǎn)物分離純化。制備方法很多,包括吸附法、共價貼附法、離子/共價交聯(lián)法、包埋法、微囊法等。

1、吸附法:用固體吸附劑將細(xì)胞吸附在其表面而使細(xì)胞固定化的方法稱為吸附法(adhesion)。操作操簡便、條件溫和、是動物細(xì)胞固定化中早研究使用的方法。缺點是:載體的負(fù)荷能力低,細(xì)胞易脫落。微載體培養(yǎng)和中空纖維培養(yǎng)是該方法的代表,稍后專門介紹。人非小肺癌細(xì)胞

JAR細(xì)胞,人絨癌細(xì)胞

JEG 細(xì)胞,人絨毛膜癌細(xì)胞

JEG-3細(xì)胞,人絨毛膜癌細(xì)胞

Bewo細(xì)胞,人絨毛膜腫瘤細(xì)胞

BT-474細(xì)胞,人乳癌細(xì)胞

MNK-7*細(xì)胞,人乳癌細(xì)胞

ZR-75-1細(xì)胞,人乳癌細(xì)胞

HTB-75細(xì)胞,人乳突狀卵巢腺癌細(xì)胞

Caov-3細(xì)胞,人乳突狀卵巢腺癌細(xì)胞

HBL-100細(xì)胞,人乳腺細(xì)胞

ADR細(xì)胞,人乳腺癌細(xì)胞

BC-009細(xì)胞,人乳腺癌細(xì)胞

BC-019細(xì)胞,人乳腺癌細(xì)胞

BC-020細(xì)胞,人乳腺癌細(xì)胞

BC-021細(xì)胞,人乳腺癌細(xì)胞

BC-022細(xì)胞,人乳腺癌細(xì)胞

Bcap-37細(xì)胞,人乳腺癌細(xì)胞

BT-20細(xì)胞,人乳腺癌細(xì)胞

HCC1937細(xì)胞,人乳腺癌細(xì)胞

Hs 578T細(xì)胞,人乳腺癌細(xì)胞

MCF 7B細(xì)胞,人乳腺癌細(xì)胞

MCF-7細(xì)胞,人乳腺癌細(xì)胞

MDA-MB-157細(xì)胞,人乳腺癌細(xì)胞

MDA-MB-231細(xì)胞,人乳腺癌細(xì)胞

MDA-MB-361細(xì)胞,人乳腺癌細(xì)胞

MDA-MB-415細(xì)胞,人乳腺癌細(xì)胞

MDA-MB-436細(xì)胞,人乳腺癌細(xì)胞

MDA-MB-453細(xì)胞,人乳腺癌細(xì)胞

MDA-MB-468 細(xì)胞,人乳腺癌細(xì)胞

MDA-MB-468-06細(xì)胞,人乳腺癌細(xì)胞

MX-1 細(xì)胞,人乳腺癌細(xì)胞

SK-BR-3細(xì)胞,人乳腺癌細(xì)胞

ZR-75-30細(xì)胞,人乳腺癌細(xì)胞

MDA-MB-435 細(xì)胞,人乳腺癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞

MCF-7B細(xì)胞,人乳腺癌系細(xì)胞

HCC38細(xì)胞,人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞

MDA-MB-175VII細(xì)胞,人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞

MDA-MB-435S細(xì)胞,人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞

UACC-812細(xì)胞,人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞

BT-549細(xì)胞,人乳腺管癌細(xì)胞

T-47D細(xì)胞,人乳腺管癌細(xì)胞

CCD-1095Sk細(xì)胞,人乳腺浸潤性導(dǎo)管癌旁皮膚細(xì)胞

SK-BR-3*細(xì)胞,人乳腺腺癌細(xì)胞

SW 1353細(xì)胞,人軟骨肉瘤細(xì)胞

GNM 細(xì)胞,人上頜牙齦癌頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌細(xì)胞

T6細(xì)胞,人舌癌細(xì)胞

TSCCA細(xì)胞,人舌鱗癌細(xì)胞

CAL 27細(xì)胞,人舌鱗癌細(xì)胞

Tca-8113細(xì)胞,人舌鱗癌細(xì)胞

TSCCa細(xì)胞,人舌鱗癌細(xì)胞

CRT 細(xì)胞,人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞

U251細(xì)胞,人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞

SH-SY5Y細(xì)胞,人神經(jīng)瘤細(xì)胞

BE(2)-M17細(xì)胞,人神經(jīng)母瘤細(xì)胞

CRL-2268細(xì)胞,人神經(jīng)母瘤細(xì)胞

IMR-32細(xì)胞,人神經(jīng)母瘤細(xì)胞

SH-5Y5Y細(xì)胞,人神經(jīng)母瘤細(xì)胞

SK-N-AS細(xì)胞,人神經(jīng)母瘤細(xì)胞

SK-N-BE(2)細(xì)胞,人神經(jīng)母瘤細(xì)胞

SK-N-MC細(xì)胞,人神經(jīng)上皮瘤細(xì)胞

A-498細(xì)胞,人腎癌細(xì)胞

A498-EGFP-puro細(xì)胞,人腎癌細(xì)胞

ACHN細(xì)胞,人腎癌細(xì)胞

KC細(xì)胞,人腎癌細(xì)胞

OS-RC-2細(xì)胞,人腎癌細(xì)胞

G-401細(xì)胞,人腎癌Wilms細(xì)胞

SK-NEP-1細(xì)胞,人腎母瘤細(xì)胞

SW-13細(xì)胞,人腎上腺皮質(zhì)癌細(xì)胞

NCI-H295R細(xì)胞,人腎上腺皮質(zhì)腺癌細(xì)胞人非小肺癌細(xì)胞

2、共價貼附法:利用共價鍵將動物細(xì)胞與固相載體結(jié)合的固定化方法稱為共價貼附法(attachment by covalent bonding)。此法可減少細(xì)胞的泄漏,但須引入化學(xué)試劑,對細(xì)胞活性有影響,且因貼附而導(dǎo)致擴(kuò)散限制小,細(xì)胞得不到保護(hù)。

3、離子/共價交聯(lián)法:雙功能試劑處理細(xì)胞懸浮液,會在細(xì)胞間形成橋而絮結(jié)產(chǎn)生交交聯(lián)作用,此固定化細(xì)胞方法稱為離子/共價交聯(lián)法(cross-linking by covalent bonding)。交聯(lián)試劑會使一些細(xì)胞死亡,也會產(chǎn)生擴(kuò)散限制。

4、包埋法:將細(xì)胞包埋在多孔載體內(nèi)部制成固定化細(xì)胞的方法稱為包埋法(entrapment)。優(yōu)點是:步驟簡便、條件溫和、負(fù)荷量大、細(xì)胞泄漏少,抗機(jī)械剪切。缺點是:擴(kuò)散限制,并非所有細(xì)胞都處于佳基質(zhì)濃度,且大分子基質(zhì)不能滲透到高聚物網(wǎng)絡(luò)內(nèi)部。一般適用于非貼壁依賴型細(xì)胞的固定化,常用載體為多孔凝膠,如瓊脂糖凝膠、海藻酸鈣凝膠和血纖維蛋白。

5、微囊法(microencapsulation:是用一層親水的半透膜將細(xì)胞包圍在珠狀的微囊里,細(xì)胞不能逸出,但小分子物質(zhì)及營養(yǎng)物質(zhì)可自由出入半透膜;囊內(nèi)是種微小培養(yǎng)環(huán)境,與液體培養(yǎng)相似,能保護(hù)細(xì)胞少受損傷,故細(xì)胞生長好、密度高。微囊直徑控制在200-400μm為宜。制備中應(yīng)注意:

溫和、快速、不損傷細(xì)胞,盡量在液體和生理條件下操作;

所用試劑和膜材料對細(xì)胞害;

膜的孔徑可控制,必須使?fàn)I養(yǎng)物和代謝物自由通過;

膜應(yīng)有足夠機(jī)械強度抵抗培養(yǎng)中攪拌。

五、抗凋亡策略在細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)中的應(yīng)用

生物反應(yīng)器動物細(xì)胞大規(guī)模生產(chǎn)過程中,細(xì)胞凋亡在細(xì)胞死亡中占主要部分。近研究顯示在大規(guī)模培養(yǎng)生物反應(yīng)器中細(xì)胞的死亡中80%是凋亡所導(dǎo)致,而不是以前所認(rèn)為的壞死。而在大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)中,細(xì)胞死亡是維持細(xì)胞高活性和高密度的大障礙。理論上講,防止或延長細(xì)胞死亡,可以大提高生物反應(yīng)器生產(chǎn)重組蛋白的產(chǎn)量。

細(xì)胞凋亡由一系列基因地調(diào)控,是多細(xì)胞生物發(fā)育和維持穩(wěn)態(tài)所必需的生理現(xiàn)象。已知凋亡的終執(zhí)行者是Caspase家族,它們均為半胱氨酸蛋白酶,各識別一個4氨基酸序列,并在識別序列C端天冬氨酸殘基處將底物切斷。Caspase含有可被自身識別的序列,可以切割活化自身而導(dǎo)致信號放大,并作用于下游Caspase成員,從而形成Caspase家族的級聯(lián)放大,終作用于效應(yīng)蛋白,引起細(xì)胞凋亡。

所以在大規(guī)模培養(yǎng)時干擾細(xì)胞在培養(yǎng)中凋亡的發(fā)生,提高細(xì)胞特異性抵制遇到壓力而引起凋亡的能力,有利于提高細(xì)胞的培養(yǎng)密度、延長細(xì)胞的培養(yǎng)周期,從而提高目標(biāo)產(chǎn)品的產(chǎn)量2-3倍。

1、營養(yǎng)物質(zhì)抗凋亡

在常規(guī)生物反應(yīng)器構(gòu)造中,營養(yǎng)耗竭或缺乏培養(yǎng)基中特殊的生長因子則引起凋亡,例如血清,糖或特殊氨基酸的耗盡。培養(yǎng)基中添加氨基酸或其它關(guān)鍵營養(yǎng)可抑制凋亡、延長培養(yǎng)時間從而提高產(chǎn)品的生產(chǎn)。大規(guī)模培養(yǎng)中細(xì)胞凋亡主要由于營養(yǎng)物質(zhì)的耗竭或代謝產(chǎn)物的堆積引起,如谷氨酰胺的耗竭是常見的凋亡原因,而且凋亡一旦發(fā)生,補加谷氨酰胺已不能逆轉(zhuǎn)凋亡。另外,動物細(xì)胞在無血清、無蛋白培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)時,細(xì)胞變得更為脆弱,更容易發(fā)生凋亡。

2、基因抗凋亡

與凋亡相關(guān)的一系列基因產(chǎn)物可對其進(jìn)行正、負(fù)向的調(diào)控,因此可通過導(dǎo)入相應(yīng)基因來調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡的機(jī)制。Bcl-2基因是目前為有效的抗凋亡基因,在多種細(xì)胞系中均表現(xiàn)出很強的抗凋亡活性。

3、化學(xué)方法抗凋亡

凋亡發(fā)生時細(xì)胞許多部位發(fā)生生化物質(zhì)的改變,有些變化如改變細(xì)胞氧化還原條件產(chǎn)生活性氧在凋亡信號階段發(fā)生,其它的如破壞線粒體膜電位、激活caspase則發(fā)生在凋亡效應(yīng)階段,這在大多數(shù)細(xì)胞死亡中是相同的。因此,阻止這些生化物質(zhì)的改變可能阻止或至少延遲細(xì)胞凋亡的發(fā)生,運用化學(xué)物質(zhì)可抑制信號效應(yīng)階段的發(fā)生,被認(rèn)為是抗調(diào)亡策略之一。

人非小肺癌細(xì)胞

  • 點擊這里給我發(fā)消息