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GIBCO胎牛血清的操作步驟與保存要點

發(fā)布時間:2019-03-22瀏覽次數(shù):965返回列表

GIBCO胎牛血清用于廣泛的細胞類型,特別是敏感的細胞系,血清中內(nèi)毒素和血紅蛋白水平zui低?內(nèi)毒素水平:≤ 10 EU/ml?血紅蛋白水平:≤ 10 毫克/分升?三過濾0.1μM。是從適合人類衛(wèi)生習慣的農(nóng)場收集的。有時,也可能用其他的牛血清,如新生牛血清或者供體牛血清。在細胞培養(yǎng)中,血清供應(yīng)了豐富的高分子蛋白,低分子量營養(yǎng)物,疏水載體蛋白和其他體外細胞生長必要的成分如激素和粘附因子。同時,血清可以增加培養(yǎng)基的緩沖能力或中和有毒成分,起到保護細胞的作用。


一、GIBCO胎牛血清的操作步驟

1、采集
在胎牛血清生產(chǎn)過程中,全血使用無菌一次性塑料袋收集,待凝結(jié)后分離,收集和冷凍儲存血清。控制胎牛血清的初始收集是控制zui終血清產(chǎn)品質(zhì)量的關(guān)鍵因素。只有初始原料符合我們的規(guī)范時才能允許生產(chǎn)。
2、血清原料
在市場存在兩個胎牛血清標準:美國農(nóng)業(yè)部標準(USDA)和歐洲標準。美國農(nóng)業(yè)部標準,原始血清必須采自未發(fā)生瘋牛病(BSE)和口蹄疫(FMD)疫情的,才可自由進口到任何,用于安全生產(chǎn)。而且研究者只有使用符合這種標準的血清,才被允許將其細胞和細胞產(chǎn)品送至其他同樣有嚴格進口條款的,進行合作交流。
3、處理過程
優(yōu)選數(shù)個批次凍存血清進行解凍,檢驗其內(nèi)毒素和血紅素的含量,滿足標準的才能在冷藏條件下充分混合繼續(xù)加工,進一步進行過濾除菌。NQBB依次通過預(yù)過濾和膜過濾來處理胎牛血清。zui后的過濾步驟為連續(xù)三次用100nm的濾膜過濾。過濾結(jié)束,血清采用無菌工藝進行分裝,整個過程有效確保zui終產(chǎn)品無菌。血清生產(chǎn)的空氣潔凈度為100級。所有分裝工作臺都通過微??諝膺^濾器過濾,并保持正壓分裝環(huán)境,對總微粒、懸浮微粒數(shù)和壓力進行監(jiān)控。分裝后,終產(chǎn)品迅速-20度凍存,并隔離,直到所有的質(zhì)量控制檢測完成。
4、FBS質(zhì)量控制
每批胎牛血清檢測確認符合各項標準,并以書面的方式記錄在質(zhì)檢報告中。
5、質(zhì)量保證
胎牛血清生產(chǎn)過程在一個嚴格控制的條件下進行。紫外線滅菌,過濾除菌和分裝是關(guān)鍵生產(chǎn)環(huán)節(jié),可以確保血清的品質(zhì)。與血清生產(chǎn)相關(guān)的數(shù)據(jù)作為專門的檔案記錄,從初步采集的原料到成品儲存的整個生產(chǎn)過程,以及質(zhì)量控制檢測和結(jié)果都有備案,并可以在監(jiān)控條件下追溯源文件。 胎牛血清生產(chǎn)過程遵循歐洲議會關(guān)于體外診斷的標準。


二、GIBCO胎牛血清的保存要點

1、熱滅活是指56, 30分鐘加熱已完全解凍的血清.加熱過程中須規(guī)則搖晃均勻。此熱處理的目的是使血清中的補體成分(complement)滅活.除非必須,一般不建議作此熱處理,因為熱處理會造成血清沉淀物顯著增多,而且還會影響血清的質(zhì)量.補體參與反應(yīng)有:細胞毒作用, 平滑肌細胞收縮, 肥大細胞和血小板釋放組胺, 增強吞噬作用, 促進淋巴細胞和巨噬細胞發(fā)生化學趨化和活化。
2、血清中的沉淀物 絮狀物:主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成,這些絮狀物不會影響血清本身的質(zhì)量.可用離心3000rpm, 5分鐘去除,也可不用處理. 顯微鏡下"小黑點":經(jīng)過熱處理過的血清,沉淀物的形成會顯著增多.有些沉淀物在顯微鏡下觀察象"小黑點",常誤認為血清受污染.一般情況下,此小黑點不會影響細胞生長,但如果懷疑血清質(zhì)量,則應(yīng)立即停止使用,更換另一批號的血清。
3、切勿將血清在37放置太久,否則血清會變得渾濁,同時血清中的有效成分會破會而影響血清質(zhì)量保存/運輸:-5°C~-20°C。
4、瓶裝血清解凍需采用逐步解凍法:-20 至 -70 低溫冰箱中的血清放入4冰箱中溶解1天。然后移入室溫,待全部溶解后再分裝。在溶解過程中需不斷輕輕搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沉淀的發(fā)生。切勿直接將血清從-20進入37解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝集而出現(xiàn)沉淀。
5、需要長期保存的血清必須儲存于-20 - 70 低溫冰箱中。4冰箱中保存時間切勿超過1個月。由于血清結(jié)冰時體積會增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前,必須預(yù)留一定體積空間,否則易發(fā)生污染或玻璃瓶凍裂。
6、一般廠商提供的血清為無菌,無需再過濾除菌。如發(fā)現(xiàn)血清有懸浮物,則可將GIBCO胎牛血清加入培養(yǎng)液內(nèi)一起過濾,切勿直接過濾血清。

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