細(xì)胞介紹

　　在PEG脅迫下，將原代培養(yǎng)的人臍靜脈細(xì)胞與抗硫鳥嘌呤的A549克隆株融合，構(gòu)建了人臍靜脈細(xì)胞株, EA.hy926。 融合子在HAT培養(yǎng)基上生長并以八因子相關(guān)抗原篩選。 EA.hy926已經(jīng)過100次以上的群體倍增(PDLs)。電鏡照片顯示W(wǎng)eibel-Palade小體的細(xì)胞質(zhì)分布以及組織特異性的細(xì)胞器，分化的內(nèi)皮細(xì)胞特性如血管生成，體內(nèi)平衡/血栓形成，血壓及炎癥反應(yīng)。

　　細(xì)胞特性

　　1) 來源：靜脈內(nèi)皮細(xì)胞與A549細(xì)胞株融合

　　2) 形態(tài)：梭形，貼壁生長

　　3) 含量：>1x106 個/mL

　　4) 污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測為陰性

　　5) 規(guī)格：T75瓶或者1mL凍存管包裝

　　運輸和保存：使用含有優(yōu)質(zhì)胎牛血清的2ml凍存管發(fā)送存活細(xì)胞。收到細(xì)胞后，可在1000RPM，常溫條件下，離心5min后，于潔凈操作臺棄去上清，加入推薦使用的培養(yǎng)基后轉(zhuǎn)移至10cm培養(yǎng)皿或者T75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，傳代達(dá)到細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，再進(jìn)行凍存。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。

　　細(xì)胞用途：僅供科研使用。

　　細(xì)胞培養(yǎng)步驟

　　一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

　　1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H，GIBCO，貨號12800017，添加NaHCO31.5g/L)，90%;胎牛血清，10%。(DMEM液體培養(yǎng)基：GIBCO，11995-065)。

　　2) 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%;二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

　　3) 凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。

　　二. 細(xì)胞處理：

　　1) 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

　　2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

　　對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

　　1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

　　2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

　　3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

　　4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

　　3)細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。

　　注意事項：

　　1. 收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

　　2. 所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

　　EA.hy926細(xì)胞，人臍靜脈融合細(xì)胞 來源：上海素爾生物科技有限公司