人腎癌Wilms細胞(G-401)

　　細胞介紹

　　G-401細胞來源于韋爾姆斯氏瘤，該細胞表達成腎細胞生長因子。

　　細胞特性

　　1) 來源：腎臟

　　2) 形態(tài)：上皮細胞樣，貼壁生長

　　3) 含量：>1x106 個/mL

　　4) 污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

　　5) 規(guī)格：T75瓶或者1mL凍存管包裝

　　運輸和保存：使用T25瓶充液發(fā)送活細胞。收到細胞后，請先在顯微鏡下檢查細胞生長狀態(tài)，并將T25瓶置于培養(yǎng)箱約6h或過夜后，再次檢查細胞狀態(tài)。若狀態(tài)良好，可按照以下細胞培養(yǎng)步驟進行細胞后續(xù)處理操作。若發(fā)現(xiàn)可疑污染物，請及時與我們?nèi)〉寐?lián)系。

　　細胞用途：僅供科研使用。

　　細胞培養(yǎng)步驟

　　一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

　　1) 準備McCOY's 培養(yǎng)基(McCOY's ，SIGMA,貨號M4892，添加NaHCO32.2g/L)，90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

　　2) 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%;二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

　　3) 凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。

　　二.細胞處理：

　　1)復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

　　2)細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

　　對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

　　1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

　　2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

　　3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

　　4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

　　3)細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。

　　注意事項：

　　1. 收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

　　2. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。